Cтраница 2
Картина расположения определенных фосфолипидов на таких хроматограммах очень сходна с наблюдаемой при выполнении двумерной ТСХ по Раузеру и др. [296], с той лишь разницей, что фосфатидилинозит и фосфатидилсерин расположены в обратном порядке, а фосфатидилглицерин более четко отделен от фосфатидилэтаноламина. [16]
Подобные элюи-рующие системы используются в одномерной ТСХ в основном для отделения холин - и этаноламинсодержащих фосфолипидов от других фосфолипидов, однако в этой системе можно также разделить смеси кислых фосфолипидов, таких, как кардиоли-пин, цитидиндифосфат диацилглицерина, фосфатидилглицерин, фосфатидилинозит, фосфатидилсерин плюс фосфатидная кислота. [17]
Полиглицерофосфатиды - фосфолипиды, производные фосфатидной кислоты, содержащие более одного остатка глицерина. К ним относятся фосфатидилглицерин и кардиолипин. [18]
Галактолипиды, описанные на стр. Остальные липиды состоят главным образом из фосфатидилглицерина и сульфолипоида ( см. стр. [19]
Приведенные в табл. 13 величины не отражают точно содержание липидов в какой-либо определенной мембране растительной клетки. Больше всего липидов в хлоропластах, которые особенно богаты стеринами, галактолипи-дами и фосфатидилглицерином. [20]
Приготавливая хроматографические пластинки для разделения бактериальных липидов, Минникин и Абдолрахимзаде [168] смешивали 40 г силикагеля Merck PF254 и 100 мл 0 2 % - ного раствора ацетата натрия в виде кашицы и наносили на подложку. На таком слое при элюировании смесью хлороформ-метанол - вода ( 65: 25: 4) фосфатидилглицерин дает компактное пятно; на непропитанных слоях пятно этого соединения вытянуто. Для разделения фосфолипидов и гликолипидов, содержащихся в растениях, Ле-паж [169] также применял двумерную ( под углом 90) хроматографию. Под действием первой смеси происходило удовлетворительное разделение фосфолипидов, вторая смесь была более эффективна при разделении гликолипидов и сопутствующих им гликозидов стерина. Пластинки сначала опрыскивали 0 5 % - ным раствором периодата натрия и оставляли на 5 мин, после чего выдерживали в атмосфере диоксида серы, чтобы удалить избыток периодата натрия, затем опрыскивали 0 5 % - ным раствором n - розанилина ( свежеобесцвеченного диоксидом серы) и оставляли до появления синих и пурпурных пятен. [21]
Метаболизм липидов у бактерий очень сложен, у некоторых микроорганизмов он играет ключевую роль в обмене веществ клетки. Так, изменение в составе дыхательной системы сопровождается изменениями в составе и метаболизме фосфолипидов, меняется соотношение фосфатидилэтаноламина, фосфатидилглицерина, фосфатидилдиглицерина, общее содержание фосфолипидов в клетке повышается. [22]
Остальные фосфоглицериды образуются из цигидинмонофос-фатфосфатидной кислоты ( СМР-РА) ( цитидиндифосфатднацилгли-церин; CDP-DG), которая получается из фосфатидной кислоты и цитидинтрифосфата. При взаимодействии этого соединения с мио-инозитом или серином образуется соответственно фосфатидилино-зит или фосфатидилсерин; реакция с глицерофосфатом приводит, с отщеплением фосфата, к фосфатидилглицерину, который может быть превращен в дифосфатидилглицерин ( кардиолипин) путем взаимодействия со второй молекулой фосфатидилглицерина или цитидинмонофосфатфосфатидной кислоты. [23]
Остальные фосфоглицериды образуются из цигидинмонофос-фатфосфатидной кислоты ( СМР-РА) ( цитидиндифосфатднацилгли-церин; CDP-DG), которая получается из фосфатидной кислоты и цитидинтрифосфата. При взаимодействии этого соединения с мио-инозитом или серином образуется соответственно фосфатидилино-зит или фосфатидилсерин; реакция с глицерофосфатом приводит, с отщеплением фосфата, к фосфатидилглицерину, который может быть превращен в дифосфатидилглицерин ( кардиолипин) путем взаимодействия со второй молекулой фосфатидилглицерина или цитидинмонофосфатфосфатидной кислоты. [24]
Показано, что биосинтез является двухстадийным процессом. На первой стадии, которая катализируется растворимым ферментом и требует присутствия АТФ, лизин активируется с образованием лизил-т - РНК. Последний далее взаимодействует с фосфатидилглицерином с образованием соответствующего эфира. [25]
В этой системе полностью разделяются фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин. Нейтральные липиды, ацилглицерины, стерины, эфиры стеринов, воска и углеводороды мигрируют с фронтом растворителя. Эта система позволяет получить разрешенные зоны фосфати-дилэтаноламина, фосфатидилглицерина, лизо-б с-фосфатидной кислоты, сфингомиелина, фосфатидилхолина и фосфатидилсе-рина вместе с фосфатидилинозитом. [26]
Биосинтез фосфатидилглицерина осуществляется в два этапа. Первый включает взаимодействие ЦДФ-диглицерида и - хя-глицеро - З - фосфа-та, приводящее к фосфатидилглицерофосфату. На второй ступени биосинтеза осуществляется ферментативное дефосфорилирование фосфати-дилглицерофосфата в фосфатидилглицерин. По-видимому, ферменты, катализирующие эти реакции, локализованы главным образом в митохондриях. [27]
Фосфатидилэтаноламин, в свою очередь, может превращ. У бактерий осуществляется др. путь биосинтеза фосфатидилсерина и фосфатидилэтано-ла. Его декарбоксилирование приводит к фосфатидилэтаноламину, а р-ция с глицерофосфатом - к фосфатидилглицерину. Последний вновь может взаимод. В биосинтезе сфинголипидов ключевое соед - церамид, образующийся в результате М - ацилирования сфингозина ацилкоферментом А. Возможен и др. путь биосинтеза цереброзидов, основанный на р-ции производных уридина со сфингозиновыми основаниями с образованием психозина ( галактозид сфингозина) и его последующем М - ацилирова-нии ацилкоферментами А. Из цереброзидов путем после-доват присоединения оста. [28]
Элюирующая система хлороформ - метанол - 40 % - ный метиламин - вода ( 65: 31: 5: 5) была предложена Гетцем и др. [305] и Айхбергом и др. [306] в качестве элюента для хромо-тографии во втором направлении. Авторы сообщают об очень хорошем разделении с помощью этого метода смеси, состоящей из кардиолипина, фосфатидилглицерина, фосфатидной кислоты, фосфатидилэтаноламина, фосфатидил - М М - диметилэтаноламина, фосфатидилхолина, фосфатидилсерина, фосфатидилинозита, ли-зофосфатидилэтаноламина, лизофосфатидилхолина, сфингомие-лина. Основная система используется главным образом для ТСХ во втором направлении. [29]
Система хлороформ - метанол - вода ( 65: 25: 4) и сходные с ней [212, 253] подходят для разделения смеси нейтральных липидов с наиболее часто встречающимися фосфолипидами всех классов. Эти фосфолипиды нестабильны в кислых растворителях и могут разлагаться при элюировании и упаривании. Методом ТСХ с использованием этой системы для элюи-рования можно разделить лизофосфатидилхолин, сфингомиелин, фосфатидилхолин с фосфатидилинозитом, фосфатидилэтанола-мин с фосфатидилсерином, фосфатидилглицерин с кардиолипи-ном и фосфатидной кислотой, нейтральные липиды. [30]