Препаративное фракционирование

Cтраница 4

ДЭАЭ-целлюлоза благодаря своей функциональной группе - диэтиламиноэтильному остатку - обладает свойствами слабого анионообменника. Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе отличается высокой разрешающей способностью. Этот ионообменник пригоден как для аналитического, так и - для препаративного фракционирования белков на колонках соответствующего размера. [46]

Электрофокусирование в геле амфотерных красителей. [47]

Электрофокусирование в геле позволяет дать быструю оценку-изоэлектрической точки, хота и не с такой точностью, как элек: - трофокусирование в градиенте плотности. Как и при работе в градиенте плотности, фракционирование в более узком диапазоне рН также позволяет получить более высокое разрешение ( см. разд. Поэтому электрофокусирование в геле на аналитическом уровне применяется для подбора условий фокусирования в градиенте плот-рости и препаративного фракционирования. [48]

К одному из наиболее важных достоинств метода последовательного растворения относится использование при выделении и обработке фракций гораздо меньших количеств растворителя по сравнению с методами осаждения. При аналитическом фракционировании можно получить кривую распределения на небольших количествах образцов ( около 1 г), к тому же процесс последовательного растворения без особого труда может быть автоматизирован. Проведение препаративного фракционирования на больших количествах полимера может осуществляться, что практически важно, с относительно небольшими количествами растворителя. Кроме того, исходя из теоретических положений, можно полагать, что полученные методом растворения высокомолекулярные фракции будут содержать значительно меньшее количество низкомолекулярных фракций, чем соответствующие фракции, выделенные при последовательном осаждении. [49]

При любой возможности не следует пользоваться лишь методом турбидиметрического титрования. Не следует также делать окончательных выводов только на основании кривых изменения мутности до тех пор, пока не будут применены другие стандартные методы исследований. На практике полезно использовать сочетание метода турбидиметрического титрования и метода препаративного фракционирования. По результатам препаративного фракционирования при этом можно проверить данные турбидиметрического титрования, а турбидиметрия позволит также оценить степень однородности полученных препаративно фракций. [50]

При препаративном фракционировании на колонках современное оборудование позволяет получить фракции с узким распределением по молекулярным весам в количестве 5 - 10 г каждая. При необходимости широких исследований физических свойств, механических характеристик или химической природы выделенных фракций часто приходится разрабатывать специальные методы исследований, которые возможно применять на малых количествах образцов, с тем чтобы сохранить ценные фракции полимеров. Одна группа исследователей полагает, что для препаративного фракционирования можно применить соответствующим образом модифицированные методы химической технологии и успешное решение этой проблемы оказало бы значительное влияние на развитие исследований в области полимеров. [51]

Осадительная хроматография протекает при градиентной элю-ции ( осадитель - растворитель) на колонках, заполненных инертной насадкой, которая принимает на себя выпавшие из подвижной фазы фракции полимера. Хроматографический режим обеспечивается встречным градиентом температуры; для этого низ колонки охлаждают, а верх - нагревают. В результате из колонки сначала выходят низкомолекулярные фракции, критическая доля осадителя для которых больше, а критическая температура ниже ( выше при нижней 6-точке) и затем высокомолекулярные фракции. Двойной градиент обеспечивает высокую селективность метода, поэтому осадительную хроматографию обычно используют для препаративного фракционирования. [52]

Для калибровки колонок необходимо наличие серии соединений с известной молекулярной массой или достаточно хорошо охарактеризованных узких фракций полимеров, которые, кроме того, должны иметь структурное сходство с исследуемыми веществами, что иногда создает дополнительные трудности при анализе углеводов. В отсутствие подходящих стандартов для калибровки колонок при анализе мо-лекулярно-массового распределения других полисахаридов часто применяют декстраны фирмы Pharmacia. Однако следует подчеркнуть, что при анализе полисахаридов, структурно отличающихся от декстранов, на результаты калибровки можно опираться при условии, что соотношение между молекулярной массой и молекулярным размером исследуемого полимера имеет тот же порядок, что и для декстрана. Универсальная калибровка, в основе которой лежит определение зависимости между Ve и IgM-JT ] ] ( где [ TJ ] - истинная вязкость, которая служит мерой гидродинамического объема молекулы в растворе) [127], может быть использована только в случае достаточно длинной полимерной цепи. Несмотря на непрекращающиеся попытки [ 129, 1301 найти некую общую зависимость, справедливую для всех полисахаридов, калибровку колонок по охарактеризованным фракциям исследуемого полисахарида, видимо, не удастся заменить. Выделение узких фракций для определения их характеристик ( такими методами, как ультрацентрифугирование, светорассеяние и др.) требует применения препаративной СЭХ, которую раньше считали медленным процессом. Однако появление в последнее время сорбентов, которые могут быть использованы в условиях высокоскоростной жидкостной хроматографии, должно в значительной степени сократить время подобного рода препаративного фракционирования. [53]

Страницы: 1 2 3 4