Cтраница 3
Чистые ганглиозиды GMI и Gnia получают следующим образом. Фракции, содержащие хроматографически чистые ганглиозиды, объединяют и растворитель отгоняют в вакууме. Чтобы предотвратить вспенивание, прибавляют w - пропиловый спирт. Воду удаляют при упаривании остатка со смесью толуол - спирт ( 1: 1 по - объему), полученный остаток растворяют в небольшом количестве смеси хлороформ - метанол ( 1: 1 по объему), выдерживают в течение ночи и осадок кремневой кислоты отделяют центрифугированием. Когда раствор станет мутным, его охлаждают до 0 С. Выпавшие в осадок ганглиозиды ( Gma, как правило, кристаллический) отделяют, а из маточных растворов получают вторую порцию ганглиозида, для чего маточные растворы либо дополнительно упаривают, либо разбавляют двукратным объемом ацетона. Если ганглиозиды элюировали смесью, в состав которой входит аммиак, объединенные фракции упаривают до малого объема, обрабатывают небольшим избытком едкого натра и диализуют в течение 3 дней. Эта процедура может использоваться и в том случае, если ганглиозиды выделялись по первой методике, хроматографирова-нием в нейтральных системах растворителей. Полученные таким образом соли ганглиозидов устойчивы при хранении в эксикаторе. [31]
Начинать хроматографирование следует наименее полярным растворителем, обычно петролейным эфиром. Скорость отбора фракций зависит от типа и масштаба хроматографического процесса. Обычно скорость течения, измеренная в мл / ч, должна быть численно равна массе ( г) использованного адсорбента. Большинство адсорбентов не затрудняет течение элюента по колонке. При применении некоторых особо тонкодисперсных адсорбентов, например оксида магния, может потребоваться введение вспомогательного фильтра, например кизельгурового. Для отбора элюата пригодны сборники фракций любого типа ( см. гл. Объем одной фракции устанавливают в соответствии с характером задачи и регулируют или с помощью переключателя с часовым механизмом при сборнике фракций, или путем изменения ( притом только уменьшения) скорости потока элюента. Отобранные в течение определенных интервалов фракции анализируют методами ТСХ или ГЖХ, разработанными для данной методики разделения, и объединяют идентичные по составу фракции. Из объединенных фракций отгоняют растворитель посредством обычной или вакуумной перегонки в роторном испарителе при низкой температуре. Элюирование продолжают до тех пор, пока не перестанет злюироваться хро-матографируемая проба. После этого элюирующую способность смеси увеличивают, повышая содержание более полярного компонента системы, который подают или в несколько порций, или постепенно ( градиентное элюирование; описание аппаратуры для градиентного элюирования см. в разд. [32]