Фронт - растворитель
Cтраница 2
Когда фронт растворителя пройдет не менее 16 см, вынимают пластинку из хрома-тографической камеры и оставляют ее при комнатной температуре до полного удаления растворителя. Используют импрег-нированную пластинку в пределах 2 ч с момента приготовления, проводя хроматографирование в том же направлении, что и импрегнирование. Наносят отдельно на пластинку по 5 мкл каждого из двух растворов в смеси 9 объемов хлороформа Р и 1 объема метанола Р, содержащих: ( А) 1 0 мг испытуемого вещества в 1 мл и ( Б) 1 0 мг стандартного образца прогестерона СО в 1 мл. [16]
Когда фронт растворителя достигает высоты 20 см, хромато-грамму вынимают из сосуда и сушат на воздухе в течение 20 мин. Затем подвергают действию паров брома ( ее помещают в сосуд, на дне которого находится 10 % - ный раствор брома в четыреххлорис-том углероде, на 10 - 15 сек. Избытку брома дают испариться с бумаги в течение 20 - 30 мин. [17]
Когда фронт растворителя переместится на определенное расстояние ( обычно 10 см), пластинку вынимают из камеры и: высушивают. [18]
 |
Аппаратура для нисходящей БХ. [19] |
Когда фронт растворителя достигнет требуемого уровня, хроматограмму вынимают, дают растворителю испариться, затем проводят обнаружение пятен распределившихся веществ путем опрыскивания полоски реагентом с помощью пульверизатора и последующего ее облучения ультрафиолетовой лампой. Для проявления пятен можно использовать и реактивы, дающие с анализируемыми веществами окрашенные соединения и другие методы. [20]
Когда фронт растворителя во второй хроматографической камере достигнет верхней части бумаги ( опыт может быть прерван, даже если фронт растворителя находится ниже), выньте из сосуда бумагу и быстро отметьте карандашом положение фронта растворителя. [21]
Когда фронт растворителя пройдет 2 / 3 длины бумаги, хромато-грамму вынимают, высушивают и вновь пропускают через нее подвижный растворитель. Так хроматограмму обрабатывают трижды. [22]
Когда фронт растворителей дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 10 мин, опрыскивают 20 % раствором серной кислоты и нагревают в сушильном шкафу при температуре 105 С в течение 10 мин. [23]
Когда фронт растворителей пройдет около 13 см, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм. На хроматограмме должно обнаруживаться доминирующее пятно фиолетового цвета с RI около 0 4 ( розавин); допускается наличие других пятен. [24]
Если фронт растворителя выходит за пределы бумаги, то подвижность данного растворенного вещества можно выразить в сравнении с подвижностью другого стандартного вещества. [25]
 |
Полоса бумаги.| Бумажная полоса, подвешенная в цилиндре и погруженная в растворитель. [26] |
Когда продвигающийся фронт растворителя приблизится к вершине, полоску бумаги снимают и отмечают на ней точку максимального продвижения. Затем ее высушивают на воздухе и обрызгивают раствором нингидрина, вещества, образующего с аминокислотами окрашенные соединения. В результате такой обработки появится много пятен, расположенных вдоль полосы; их следует отметить карандашом. [27]
Дают фронту растворителя подняться на 14 см выше линии населения, используют нелинованную хроматогра-фическую камеру. Готовят 4 испытательных раствора следующим образом: для приготовления раствора ( А) помещают 1 0 г растертого в тонкий порошок испытуемого вещества в пробирку с притертой пробкой, добавляют 5 мл эфира Р и встряхивают с помощью механического шейкера в течение 30 мин. Центрифугируют пробирку до получения прозрачной надосадочной жидкости и отделяют его от твердого осадка. Для приготовления раствора ( Б) разводят 1 мл раствора А до 10 мл этанолом ( - 750 г / л) ИР. Для приготовления раствора ( В) растворяют 25 мг 4-хлорацстанилида Р в 50 мл этанола ( - 750 г / л) ИР. Для приготовления раствора ( Г) растворяют 0 25 г 4-хлорацетанилида Р и 0 1 г испытуемого вещества в количестве этанола ( - 750 г / л) ИР, достаточном для получения 100 мл. Наносят на пластинку отдельно 200 мкл раствора А и по 40 мкл каждого из 3 остальных растворов. Любое пятно, соответствующее 4-хлорацетанилиду, которое дает раствор А, не должно быть более интенсивным, чем аналогичное пятно, которое дает раствор В. Любое пятно, которое дает раствор Б, кроме основного пятна и пятна, соответствующего 4-хлорацетанилиду, не должно быть более интенсивным, чем пятно, которое дает раствор В. [28]
Под фронтом растворителя понимают видимую границу распространения растворителя по бумаге. [29]
Скорость перемещения фронта растворителя во время элюирования остается постоянной. [30]
Страницы: 1 2 3 4