Cтраница 4
В этой системе фронт растворителя примерно за 60 мин поднимается на 8 см, ориентировочная величина Rf X 100 составляет для никотиновой кислоты 35 и для амида никотиновой кислоты 60 - 70, и оба пиридиновых соединения можно после опрыскивания точно идентифицировать и определить количественно. [46]
После того как фронт растворителя пройдет некоторое расстояние вдоль слоя сорбента, пластинку вынимают из сосуда с растворителем и компоненты смеси проявляют при помощи опрыскивания адсорбента подходящим реагентом. Частичную идентификацию компонентов можно проводить, измеряя значения Rf; соответствующие значения для разделенных зон сравнивают со значениями Rf для чистых компонентов, полученных в тех же условиях. На рис. 14.4 показана идеальная хромато-грамма, на которой три компонента смеси имеют такие же значения Rf, как. [47]
После того как фронт растворителя поднимется до верхнего края пластинки, ее вынимают и сушат на воздухе, избегая прямого солнечного света. После этого пластинки готовы к работе. Пла етинкй, импрегнированные о-толидином, хранят в эксикаторе. Пластинки силуфол UV-254 предварительно промывают дистиллированной водой в хроматографической камере, высушивают на воздухе и непосредственно перед использованием активируют в сушильном шкафу 4 мин при 65 С. [48]
После того как фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут для испарения растворителя. [49]
В этой системе фронт растворителя примерно за 60 миН поднимается на 8 см, ориентировочная величина Rf X 100 составляет для никотиновой кислоты 35 и для амида никотиновой кислоты 60 - 70, и оба пиридиновых соединения можно после опрыскивания точно идентифицировать и определить количественно. [50]
После того как фронт растворителя достигнет высоты не менее 15 см, вынимают пластинку из хроматографической камеры и оставляют стоять по меньшей мере на 5 мин. Используют импрегнированную пластинку в пределах 2 ч с момента приготовления, проводя хроматографирование в том же направлении, что и импрегнирование. Проводят хроматографирование до прохождения фронта растворителя на 12 см. Вынимают пластинку из хроматографической камеры, высушивают при 115 С в течение 20 мин, охлаждают, опрыскивают смесью 15 объемов раствора 25 г трихлоруксусной кислоты Р в 100 мл этанола ( - 750 г / л) ИР и 1 объема свежеприготовленного раствора тозилхлорамида натрия Р с концентрацией 30 мг / мл и затем нагревают пластинку при 115 С в течение 5 мин. [51]
Поскольку при элюировании фронт растворителя неразличим, скорость движения растворителя определяют и регулируют с помощью соединений-маркеров. Декстра-новый синий, применяемый в гель-фильтрации на колонках для определения свободного объема, является плохим маркером, поскольку при фракционировании он имеет обыкновение давать хвосты. В зависимости от скорости движения маркеров регулируют угол наклона пластинки, задавая тем самым скорость движения элюента. Указать заранее оптимальный угол наклона для данного типа геля невозможно, поскольку он зависит от многих факторов, например от свойств партии геля и консистенции суспензии. Пробег для веществ, мигрирующих со свободным объемом, должен составлять не менее 15 см. При большем пробеге ( до 30 - 40 см) наблюдается лучшее разрешение и вместе с тем не происходит заметного размывания зон. [52]
После того как фронт растворителя достигнет высоты не менее 15 см, вынимают пластинку из хроматографической камеры и оставляют стоять по меньшей мере на 5 мин. Используют импрегнирован-ную пластинку в пределах 2 ч с момента приготовления, проводя хроматографирование в том же направлении, что и импрег-нирование. В качестве подвижной фазы используют смесь. Наносят отдельно на пластинку по 1 мкл: каждого из трех растворов в смеси равных объемов метанола Р и хлороформа Р, содержащих: ( А) 5 0 мг испытуемого вещества в 1 мл, ( Б) 5 0 мг стандартного образца дигоксина СО в 1 мл и ( В) 0 25 мг стандартного образца дигоксина СО в 1 мл. Проводят хроматографирование до прохождения фронта растворителя на 12 см. Вынимают пластинку из хроматографической камеры, высушивают при 115 С в течение 20 мин, охлаждают, опрыскивают смесью 15 объемов раствора 25 г трихлоруксусной кислоты Р в 100 мл этанола ( - 750 г / л) ИР и 1 объема свежеприготовленного раствора тозилхлорамида натрия Р с концентрацией 30 мг / мл и затем нагревают пластинку при 115 С в течение 5 мин. Любое пятно, полученное с раствором А в ультрафиолетовом свете, кроме основного пятна, не должно быть более интенсивным, чем пятно, полученное с раствором В. [53]
После того как фронт растворителя поднимется приблизительно на 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют до полного испарения его ларов. Для проявления пятен пластинки опрыскивают концентрированной серной кислотой или помещают в эксикатор с йодом на 5 - 7 мин. В присутствии исследуемых веществ на пластинке проявляются в первом случае зеленые ( МФА), красно-фиолетовые ( фурфурол) и черные ( фуриловый спирт), во-втором - желто-коричневые пятна. [54]
После того как фронт растворителей прошел по хроматограмме путь в 30 - 35 см ( это обычно осуществляется за 18 - 20 час. После этого берут соответствующие полосы с пяти хромато-грамм, их измельчают, заливают 30 мл дистиллированной воды и элюируют на качалке в течение 4 час. Затем водный элюат отфильтровывают под вакуумом и упаривают до 8 мл. Активность гиббереллиноподобных веществ определяют с помощью биологических проб. [55]