Необратимый ингибитор

Cтраница 2

Совершенно иные отношения наблюдаются при изучении взаимодействия необратимых ингибиторов, таких как ФОС, с ХЭ. [16]

Следовательно, если в реагирующей системе фермент - необратимый ингибитор процесс прошел до конца и при этом активность фермента ( скорость ферментативной реакции) снизилась на 50 %, то величина / 60 представляет собой стехиомет-рическое количество ингибитора, равное половине взятого в опыт количества фермента. [17]

Функциональные группы активного центра химотрипсина идентифицированы с помощью необратимых ингибиторов. Остаток Ser-195 был модифицирован диизопропилфторфосфатом и фенил-метилсульфофторидом, а остаток His-57 - г4 - тозил - Ь - фенилала-нил-хлорметилкетоном ( см. рис. 89 и с. Двухстадийность процесса химотрипсинового гидролиза была обнаружена при изучении кинетики гидролиза п-нитрофени л ацетата. [18]

При 2 - 10 - 2 М в присутствии Н2О2 необратимый ингибитор каталазы; не оказывает влияния на пе-роксидазу. При 10 - 4 М вызывает хлороз, разрушение мембран хлоропластов; блокирует образование белковой 18 S-фракции I и хлоропластной ДНК; блокирует образование 70 S-ри-босом. [19]

Схема зависимости кажущей. [20]

Физический смысл этой зависимости логично вытекает из постулированного механизма действия необратимого ингибитора и теории Михаэлиса. В отсутствие субстрата весь фермент свободен ha) для реакции с ингибитором; при низких концентрациях субстрата концентрация комплекса Михаэлиса линейно возрастает с ростом концентрации субстрата и, следовательно, линейно падает концентрация свободного фермента, способного к реакции с ингибитором. [21]

Об одинаковом влиянии концентрации тетраметиламмония на константы скорости реакции всех трех необратимых ингибиторов свидетельствуют данные табл. 32, показывающие снижение величины константы ( в %) при увеличении концентрации ионов обратимого ингибитора. Подобные результаты были получены для тетраэтил-аммоний-иона; это позволило предположить, что все три ФОС в присутствии ионов тетраалкиламмония реагируют лишь с полностью свободными активными центрами и не реагируют с нуклео-фильными группировками ферментов, если анионная группа занята ионом тетраалкиламмония. Иными словами, реакционная способность нуклеофильной группировки к ФОС полностью утрачивается, если анионная группировка занята ионом тетраалкиламмония. [22]

Несколько иным является подход к исследованию влияния температуры на взаимодействие ферментов с необратимыми ингибиторами. [23]

По-видимому, исторически сложилось так, что применение величины / во для характеристики необратимых ингибиторов было некритически заимствовано из опыта исследования обратимых ингибиторов. Возможно, что при этом важную роль играла недостаточная изученность механизма действия необратимых ингибиторов и стремление провести аналогию с действием обратимых ингибиторов. Позднее накопился большой экспериментальный материал по характеристике необратимых ингибиторов с использованием / 8о в качестве меры их антиферментной активности. Любопытно, что в некоторых случаях эта мера позволяла проводить сопоставление между химическим строением и антиферментным действием в рядах родственных по строению ингибиторов. По-видимому, это объясняется тем, что в подобных случаях время взаимодействия ингибитора с ферментом в среднем у разных авторов не слишком различалось и реакция не доходила до конца. Однако при более тщательном исследовании возникли, как и следовало ожидать, явные противоречия, объясняющиеся неадэкватностью параметра / 6о для необратимых ингибиторов. [24]

Перспективны, по-видимому, методы определения концентрации каталитических центров, основанные на использовании высокоспецифичных необратимых ингибиторов ферментов. Эти методы, как показывает наш опыт, дают надежные результаты, если соблюдены необходимые требования к ингибиторам. Сущность методов будет описана после рассмотрения теоретических вопросов кинетики ингибирования ферментов. [25]

Мы уже знаем, что фосфор-органические соединения типа диизопропил-фторфосфата ( ДФФ) являются специфическими необратимыми ингибиторами таких ферментов. Было доказано, что, например, в химотрипсине фос-форильная группа присоединяется к гидроксилу одного из остатков серина. В химотрипсине имеется более 20 остатков серина. Так как одна молекула ДФФ полностью убивает активность фермента, то было ясно, что эта одна из сериновых групп играет особую роль и тесно связана с активным центром. [26]

Таким образом, согласно этому уравнению, если верно предположение, что в присутствии обратимого ингибитора необратимый ингибитор не реагирует с какими-либо группировками активного центра, то между обратной величиной бимолекулярной константы скорости реакции фермента с необратимым ингибитором и концентрацией обратимого ингибитора должна быть линейная зависимость. [27]

Производное уридина, фторурацил, превращается в клетке во фтордезок-сиуридилат ( F - dUMP) - мощный необратимый ингибитор тимидилат-син-тазы. Как вы объясните тот факт, что фторурацил подавляет рост быстро делящихся раковых клеток у экспериментальных животных. [28]

Здесь с известным успехом могут быть применены кинетические методы, основанные, в частности, на анализе действия необратимых ингибиторов. [29]

Встречаются ингибиторы ферментативных реакций, которые, строго говоря, не могут быть отнесены ни к обратимым, ни к необратимым ингибиторам. Речь идет об ингибиторах, которые при взаимодействии с ферментом образуют первоначально диссоциирующий комплекс, однако этот комплекс аналогично фермент-субстратному комплексу претерпевает дальнейшие химические превращения с образованием более прочных связей между ингибитором и ферментом и которые могут разрываться, например, под действием воды, с освобождением фермента и образованием продуктов распада ингибитора. Примером таких ингибиторов в отношении некоторых гидролаз эфиров карбоновых кислот могут быть производные N-алкилкарбаминовых кислот, которые до недавнего времени относились к обратимым ингибиторам. [30]

Страницы: 1 2 3 4