Cтраница 2
Майерс и Смит [27] описали методику биоавтографического анализа на незакрепленных слоях эритромицина и других антибиотиков. После завершения разделения хроматограммы сушат и покрывают увлажненной фильтровальной бумагой, положенной на чистую стеклянную пластинку. Затем хроматографиче-скую пластинку переворачивают и края фильтровальной бумаги загибают назад, а носитель слоя. Удалив наружную стеклянную пластинку, прижимают бумагу, покрывающую слой, к зернистому слою агара ( авторы приводят подробную методику приготовления такого слоя агара с использованием Streptococcus lactis) и выдерживают 2 ч при 37 С. [16]
После опрыскивания раствором хроматограммы сушат 1 - 2 мин при 80 С и затем помещают в пары аммиака. Барбитураты проявляются и в виде фиолетовых пятен. [17]
Закончив хроматографирование, бумагу подсушивают под тягой и оставляют на ночь. На следующий день хроматограмму сушат при температуре 60 - 80 в течение 2 - 3 часов для удаления следов муравьиной кислоты. [18]
Затем добавляют дистиллированную воду и доводят раствор до метки. После извлечения из камеры хроматограммы сушат вначале на воздухе, затем 5 - 10 мин в сушильном шкафу при 60 С для удаления из бумаги остатков органического растворителя. Высушенные хроматограммы при помощи пульверизатора опрыскивают жидкостью для орошения до тех пор, пока ( просмотр на свет) бумага не пропитается жидкостью равномерно. Далее хроматограммы снова сушат 5 - 10 мин при 60 С и облучают ультрафиолетовым светом. [19]
Хроматограмму смачивают в 1 % - ном растворе изопропилата алюминия в смеси толуола и циклогексана ( 1: 1), а затем помещают на нагретую стеклянную пластинку и прикрывают другой пластинкой. Через 2 - 3 мин верхнюю пластинку снимают и Хроматограмму сушат. [20]
По характеру методики мы различаем также проточную ( непрерывную) хроматографию, соответствующую проявительной хроматографии в колонках ( с тем различием, что не всегда элюируются все зоны), повторное хроматографирование, когда хроматографический процесс прерывают по достижении определенного положения фронта растворителя, хроматограмму сушат, после чего вновь проводят хроматографирование ( иногда по нескольку раз) с той же или другой системой растворителей, и, наконец, одно - и двумерную, круговую и центрифужную хроматографию, а также хроматографию на хроматограммах клиновидной формы. [21]
Процесс оканчивают, когда фронт растворителя находится в 2 см от верхнего края пластинки. Затем вносят 3 капли 30 % - ного раствора HjOj и сохраняют в склянке из коричневого стекла. Хроматограмму сушат 1 - 2 мин при 80 С и облучают УФ-светом в течение 15 мин. Пятна, содержащие хлор, окрашиваются в коричневый цвет. [22]
Спирты ряда С7 - С10 делят на хроматографической бумаге быстрая, которую после нанесения проб пропитывают 10 % - ным раствором вазелинового масла в гексане. Разделение осуществляют в камере размерами 200X350 мм и заканчивают, когда подвижный растворитель пройдет хроматографический путь - 25 см от линии старта. Далее хроматограмму сушат в вакуумном сушильном шкафу при температуре 100 С в течение 20 мин, а затем проявляют. [23]
Сначала применяют систему, которая делит менее полярные вещества. При этом растворитель продвигается вперед почти до конца пластинки. Затем хроматограмму сушат для удаления растворителя, и хроматографирование проводят в другой системе, которую пропускают на расстояние, более короткое, чем первую систему растворителей. Применение этого способа часто дает хорошие результаты. Возможно также ступенчатое разделение смесей с применением третьей ступени. [24]
Хроматографирование проводят в течение 24 часов при 5 мнатной температуре. После этого хроматограмму вынимают из камеры, высушивают под тягой феном или вентилятором в течение 15 - 20 минут и оставляют на ночь. На другой день хроматограмму сушат при температуре 60 - 80 около 2 часов для удаления следов муравьиной кислоты. [25]
Бепзидии, которым также можно опрыскивать хроматограмму, действует более длительный период. Хроматограмму следует дважды промыть 2 % - пым раствором уксусной кислоты. Избыток кислоты отсасывают и хроматограмму сушат на воздухе. С о-толидшюм окраска более интенсивна, хотя с бсп-зидтпгом она более устойчива. [26]
Основные растворы готовят путем растворения хлоридов Си, U02, Pb, Fe, Bi, Sb, Cd, Ti ( OH) 4, NH4V03 и ( NH4) 2Mo04 в 20 % - ном водном растворе соляной кислоты. Хроматографирование ведут нисходящим способом в системе, состоящей из к-бутанола и 5 % концентрированной соляной кислоты. Хроматограмму сушат лампой инфракрасного света, затем опрыскивают насыщенным раствором бутанола в воде и вновь сушат. На нижней части хроматограммы вместе с Мо остаются Fe, Bi, Sb, Cd; на верхней части - V, Си, U0a, Pb, Ti. Полученные при экстракции растворы выливают в специальные сосуды. Для удаления ионов хлора из раствора к водному экстракту и экстракту в салициловой кислоте прибавляют 1 каплю суспензии Hg2S04 в разбавленной серной кислоте. После фильтрования все три экстракта смешивают и добавляют воду до определенного объема. Анализ катионов осуществляют полярографическим методом. Отдельные катионы восстанавливаются при следующих потенциалах полуволны: V - 0 025 в, Си - 0 374е; 1ТО2 - 0 575 в; Pb - 0 725 в; Ti - 1 025 в; Fe - 0 025 в; Мо ( в виде молибденового синего) - 0 20 в; Bi - 0 40 в; Sb - 0 60 в; Cd - 1 125 в. [27]
Затем, отфильтровав осадки, экстракты упаривают до 2 мл на воздухе при комнатной температуре. На две пластинки наносят по 7 - 10 - 3 мл экстрактов и 1 % - ные растворы свидетелей: на одну пластинку 1 % - ный раствор пиромеллитов ого диангидрида в этаноле, на другую-1 % - ный раствор додекаметилендиамина в метаноле. Пластинки опускают в камеру со смесью растворителей и проводят хроматографирование до тех пор, пока слой растворителя не достигнет линии фронта. После окончания разделения хроматограммы сушат на воздухе 24 ч, затем проявляют, опрыскивая их раствором бромфенолового синего. Визуальным сравнением интенсивности окраски пятен проб и свидетелей находят и рассчитывают содержание мономеров. [28]
После нанесения проб хроматографическую бумагу протягивают до стартовой линии, не касаясь нанесенных проб, через 50 % - ный раствор ДМФА в ацетоне или этаноле, находящийся в эмалированной кювете. Затем бумагу отжимают между листами фильтровальной бумаги и проделывают ту же операцию с другим ее концом. После этого в течение 10 мин испаряют на воздухе растворитель с поверхности бумаги, а затем последнюю помещают в герметично закрываемую хроматографическую камеру, насыщенную предварительно в течение ночи парами системы растворителей: ДМФА - гексан. Разделяют методом нисходящей бумажной хроматографии до тех, пор, пока подвижный растворитель ( гексан) не пройдет хроматографический путь, равный 40 см. Затем хроматограмму сушат на воздухе и проявляют. [29]
Для хроматографирования в камеру, которой служит стеклянная банка с хорошо пришлифованной крышкой, опускают подставку для стержня и наливают в нее такое количество прозрачного ( мутный не допускается) растворителя, чтобы его слой был высотой 3 - 5 см. На стеклянный стержень ( палочку) нанизывают через крестообразные разрезы восемь полосок на расстоянии 3 - 5 см друг от друга и, держа стержень за середину, осторожно вешают его на крючки подставки в банке. При этом концы хроматограмм ( полосок) должны погрузиться в растворитель на 1 - 1 5 см. Банку закрывают. Во время хроматографирования надо следить, чтобы ленты не соприкасались, а их концы до окончания хроматографирования оставались погруженными в растворитель на 1 - 1 5 см. Температура окружающего воздуха должна быть 18 - 25 С. Когда растворитель дойдет по полоске до стержня, банку открывают, стержень с хроматограм-мами вынимают, банку закрывают, а стержень кладут на подставку в вытяжном шкафу и хроматограммы сушат на воздухе до полного удаления запаха растворителя. Если хотят получить отделение не только гексоз от пентоз, но разделить смесь на отдельные сахара, то проводят многократное хроматографиро-вание следующим образом. Высушенные хроматограммы на стержне снова ставят в банку с растворителем, ждут, когда растворитель дойдет до стержня, вынимают и сушат их. [30]