Cтраница 2
Если направить ультрафиолетовые лучи на еще не высушенную хроматограмму, то на темнофиоле-товой бумаге будут видны бледнофиолетовые пятна. Интенсивность флуоресценции существенно зависит от температуры. Заметная флуоресценция появляется только при 37; с увеличением температуры интенсивность ее увеличивается. [16]
![]() |
Пример двумерной хромате - потоке какого-либо раствори-граммы 18 аминокислот ( из Бэили, /. г. [17] |
Для обнаружения и количественного определения аминокислот по окончании разделения высушенные хроматограммы обрабатывают 0 5 % - ным раствором нингидрина в ацетоне. Аминокислоты проявляются в виде фиолетовых пятен; пятна вырезают, окрашенный комплекс извлекают спиртовым раствором сернокислой меди и интенсивность окраски измеряют при длине волны 575 ммк. По калибровочным кривым, построенным для каждой аминокислоты, находят концентрацию компонентов смеси. Определение цистина производят после превращения его в цистеиновую кислоту путем предварительного окисления белка надмуравьиной кислотой ( см. гл. [18]
![]() |
Прибор для круговой хроматографии.| Бумажная хром атогр эф ия. [19] |
Так как пятна аминотолуола на бумаге бесцветны, то для их обнаружения высушенную хроматограмму подвергают проявлению специальными реагентами, после чего пятна становятся заметны. [20]
Аминокислоты проявляют 0 1 % - ным раствором нингидрина в спирте, для чего высушенную Хроматограмму опрыскивают проявителем и помещают на 5 - 10 мин в сушильный шкаф при температуре 100 С. [21]
После извлечения из камеры хроматограмм их сушат вначале на воздухе, затем 5 - 10 мин в сушильном шкафу ири 60 С для удаления из бумаги остатков органического растворителя. Высушенные хроматограммы из пульверизатора опрыскивают жидкостью для орошения ( см. выше) до тех пор, пока при просмотре на свет бумага равномерно не пропитается жидкостью. Далее хроматограммы снова сушат 5 - 10 мин при 60 С и облучают ультрафиолетовой лампой. [22]
После извлечения из камеры хроматограмм их сушат вначале на воздухе, затем 5 - 10 мин в сушильном шкафу при 60 С для удаления из бумаги остатков органического растворителя. Высушенные хроматограммы при помощи пульверизатора опрыскивают жидкостью для орошения ( см. выше) до тех пор, пока при просмотре на свет бумага равномерно пропитается жидкостью. Далее хроматограммы снова сушат в течение 5 - 10 мин при 60 С и облучают ультрафиолетовой лампой. [23]
Помехи от растительных пигментов устраняются в процессе гидролиза окислением их перекисью водорода. Высушенные хроматограммы обрабатывают парами брома и едким кали. Проявленные желтые пятна вырезают, экстрагируют щелочью и паратион определяют спектрофотометрически при длине волны 400 тр. [24]
Процесс хроматографирования при 20 - 22 длится 1 / 2 - 2 часа, после чего хроматограмму удаляют из камеры и быстро высушивают на воздухе. Высушенную хроматограмму разрезают вдоль листа на 4 равные полоски. [25]
Дотрево и Бизерт [49] применили двухмерную хроматографию, используя в первом направлении изоамиловый спирт, насыщенный водой ( при продвижении фронта растворителя на 20 - 25см при 20), и смесь бензол - - уксусная кислота - вода ( 1: 1: 1) ( при продвижении фронта растворителя на 30 см) во втором направлении. При выдерживании высушенных хроматограмм в парах аммиака тиогидантоины тирозина и триптофана обнаруживаются в виде голубых пятен. [26]
После разделения высушенную хроматограмму протягивают через смесь 90 мл 0 5 % - ного раствора нингидрина в ацетоне, 5 мл воды и 5 мл ледяной уксусной кислоты и высушивают 15 мин при 90 С - Затем бумагу пропитывают раствором соли меди, для приготовления которого к 1 мл насыщенного раствора нитрата меди прибавляют 0 02 мл 65 % - ной азотной кислоты и доводят ацетоном до 100 мл. Высушивают в течение 30 мин при комнатной температуре в темном месте. [27]
Для установления присутствия ненасыщенных жирных кислот используют йодно-крахмальный способ. Для этого промытую и высушенную хроматограмму опрыскивают 1 % раствором йода в хлороформе. После высушивания фон обесцвечивается и проявляются желтые пятна. Последующее опрыскивание хроматограмм 0 5 % раствором крахмала вызывает появление темно-синих пятен на светло-синем фоне. Этот способ менее чувствителен, чем основанный на образовании висмутовых солей жирных кислот. [28]
Затем добавляют дистиллированную воду и доводят раствор до метки. После извлечения из камеры хроматограммы сушат вначале на воздухе, затем 5 - 10 мин в сушильном шкафу при 60 С для удаления из бумаги остатков органического растворителя. Высушенные хроматограммы при помощи пульверизатора опрыскивают жидкостью для орошения до тех пор, пока ( просмотр на свет) бумага не пропитается жидкостью равномерно. Далее хроматограммы снова сушат 5 - 10 мин при 60 С и облучают ультрафиолетовым светом. [29]
Разделение ведут в смеси метанол - ацетон ( 3: 1) в течение 19 часов. Высушенные хроматограммы закладывают в кассеты с рентгеновской пленкой на 5 - 7 суток и более в зависимости от активности исходных пятен на хроматограммах. [30]