Высушенная хроматограмма
Cтраница 4
Для хроматографирования в камеру, которой служит стеклянная банка с хорошо пришлифованной крышкой, опускают подставку для стержня и наливают в нее такое количество прозрачного ( мутный не допускается) растворителя, чтобы его слой был высотой 3 - 5 см. На стеклянный стержень ( палочку) нанизывают через крестообразные разрезы восемь полосок на расстоянии 3 - 5 см друг от друга и, держа стержень за середину, осторожно вешают его на крючки подставки в банке. При этом концы хроматограмм ( полосок) должны погрузиться в растворитель на 1 - 1 5 см. Банку закрывают. Во время хроматографирования надо следить, чтобы ленты не соприкасались, а их концы до окончания хроматографирования оставались погруженными в растворитель на 1 - 1 5 см. Температура окружающего воздуха должна быть 18 - 25 С. Когда растворитель дойдет по полоске до стержня, банку открывают, стержень с хроматограм-мами вынимают, банку закрывают, а стержень кладут на подставку в вытяжном шкафу и хроматограммы сушат на воздухе до полного удаления запаха растворителя. Если хотят получить отделение не только гексоз от пентоз, но разделить смесь на отдельные сахара, то проводят многократное хроматографиро-вание следующим образом. Высушенные хроматограммы на стержне снова ставят в банку с растворителем, ждут, когда растворитель дойдет до стержня, вынимают и сушат их. [46]
Через час после осаждения осадок катехинов отделяли и в фильтрате анализировали содержание галловой кислоты колориметрически по реакции с фосфомолибденовой кислотой. Однако использованный Ошима и Накабаяши метод нельзя считать вполне надежным, так как за 1 час пребывания в сильнокислой среде мог происходить гидролиз галли-рованных катехинов с высвобождением значительных количеств галловой кислоты. Почти с равным успехом можно использовать непосредственно этил-ацетатный экстракт из 2 - 3 г листьев. Высушенную хроматограмму просматривали в УФ-свете, пятна с темно-синей флюоресценцией, содержащие ( -) - эпигаллокатехин-галлат ( основной компонент), ( -) - галлокатехингаллат и свободную галловую кислоту, вырезали и элюировали трехкратным настаиванием с этанолом. [48]
Перед проведением микробиологической пробы 6-аминопенициллановую кислоту превращают в пенициллин G на слое. Для бутанола, забуференного до рН 4 6, Rf 6-аминопенициллановой кислоты и пенициллина V соответственно равны 0 09 и 0 23; для смеси бутанол-вода - уксусная кислота ( 40: 40: 1) они составляют 0 26 и 0 56 соответственно. При проведении биологической пробы хроматогра-фичсскую пластинку помещают на пластмассовый противень, который подрезают так, чтобы соответствующую ему пластинку с таким слоем можно было непосредственно облить зараженным ( Bacillus subtilis) агаровым студнем. Поскольку при приготовлении агаровой среды применяют хлорид трифенилтетразолиния, зараженную среду следует покрыть слоем стерильного агарового студня, чтобы предохранить от контакта с кислородом. Для обеспечения диффузии антибиотика в слой агара покрытую им пластинку выдерживают час в холодильнике при 0 С, после чего в течение 16 ч при 37 С выращивают микроорганизмы. Зоны антибиотика светло-желтые, а зоны роста бактерий красно-коричневые. Клайн и Голеб [41] обнаружили, что высушенную хроматограмму желательно опрыскивать агаром при 100 С, применяя пистолет Де Вильбисса для разбрызгивания красок под давлением воздуха 2 атм. Такое покрытие предохраняет пятна антибиотиков от расползания, когда пластинки помещают на подносы и покрывают зараженной средой. [49]
Страницы: 1 2 3 4