Cтраница 4
При разделении методом бумажной хроматографии смесей Сахаров, полученных при гидролизе 3 6-ангидроцеллюлозы, синтезированной по уравнениям (IV.68) и (IV.69), были идентифицированы 3 6-ангидроглюкоза ( выход 48 - 66 мол. Эти результаты указывают на практически количественное превращение звеньев 6 - О-тозилглюкозы в звенья 3 6-ангидроглюкозы. Результаты, полученные при периодатном окислении 3 6-ангидропроизводных целлюлозы, согласуются с данными количественной хроматографии. [46]
Для измерения полной площади пика вручную чаще всего используют 2 способа: планиметрирование и взвешивание вырезанных по контуру хроматограммы пиков. Планиметрирование пиков обычными планиметрами с достаточной точностью удается осуществить лишь в случае достаточно широких и больших по площади пиков. Поскольку такие пики встречаются сравнительно редко, этот метод не нашел применения в количественной хроматографии. Вырезание и последующее взвешивание пиков является довольно удобным и сравнительно точным методом определения полной площади пика. Кайзер [5], подробно изучавший этот метод, рекомендует его для особо трудных измерений, в частности, для сильно асимметричных и перекрывающихся пиков. [47]
Попытка проанализировать сложные смеси, например, растительных экстрактов, сопряжена с трудностями, обусловленными различными пропорциями присутствующих компонентов. Так, в работе [3] точно установлено, что публикуемые значения Rf для индивидуальных веществ могут иногда вводить в заблуждение. Некоторые вещества в смеси дают большие значения Rf, чем значения Rf, полученные для эквивалентных количеств того же индивидуального вещества, другие дают меньшие величины Rf. Изменение в количестве вещества, наносимого на пластинку, может также вызывать обращение относительных положений веществ. Поэтому для получения удовлетворительных результатов в количественной хроматографии в тонком слое необходимо подтверждать идентичность определяемых веществ с помощью цветных реакций или методом ультрафиолетовой спектрофотометрии. [48]
Особенно ощутимы эти различия при ТСХ, когда большинство исследователей для приготовления пластин используют ручное распределение сорбента по поверхности. Мы не будем детально рассматривать работы, посвященные этому вопросу, отметим только, что некоторыми авторами указывалось, что различие в хроматографическом поведении может наблюдаться и тогда, когда листы хроматографической бумаги взяты из одной и той же пачки. Может быть, влияние различий между листами на результаты количественной хроматографии несколько преувеличено в ряде работ, но до тех пор, пока не будет доказано обратное, с этим источником ошибок следует все же считаться. [49]
Полоски подсушивают на воздухе и помещают в широкий бюкс. Полоски картона ( картон для электрофореза) размером 2 5X40 см смачивают боратным буферным раствором и помещают в камеру прибора для электрофореза. Полоски бумаги с исследуемым раствором кладут на ленты картона, лежащие на рамке камеры прибора так, чтобы они были вблизи катода и на расстоянии 4 - 5 см от сгиба картона. Электрофореграммы высушивают - и разрезают на отдельные участки длиной по 2 см. Полисахариды с каждого отрезка элюируют водой или раствором щелочи. Элюаты гидролизуют с 2 % - ным раствором НС1 в течение 3 ч при слабом кипении и затем исследуют хроматографией на бумаге или газожидкостной хроматографией. Качественная и количественная хроматография компонентов в гидролизатах элюатов позволяет установить порядок распределения полисахаридов на электрофореграммах и их химический состав. [50]