Cтраница 3
Химически связанные фазы применяются в основном в современной высокоэффективной жидкостной хроматографии ( ВЭЖХ) в виде обращенных фаз, когда неподвижная фаза неполяр-на, а подвижная - полярна, а в самое последнее время - в распределительной ион-парной хроматографии, которая позволяет анализировать как ионизированные, так и неионизированные соединения. Использование химически связанных фаз относительно ограничено по той причине, что, во-первых, не совсем ясен механизм разделения и нельзя предсказать параметры удерживания, во-вторых, при разделении на указанных фазах главную роль играют адсорбционные явления и теряются преимущества газо-жидкостной хроматографии. [31]
В начале 1982 г. было опубликовано исследование, посвященное сопоставлению возможностей использования RP-8 -, RP-18 - и фенил-силикагелей для фракционирования трипсиновых пептидов в двух вариантах линейной градиентной элюции: обычного градиента концентрации пропанола при рН 4 и ион-парной хроматографии с градиентом концентрации ацетонитрила. Были выбраны следующие комбинации растворителей при элюции пропанолом: раствор А - 0 25 М пиридин в 0 9 М СН3СООН ( рН 4); раствор В - 60 % - ный раствор пропанола в растворе А. [32]
В ион-парной хроматографии температура оказывает влияние как на удерживание, так и на эффективность, но не в той же степени, как это имеет место в ионообменной хроматографии. Ион-парная хроматография обычно является гораздо более эффективным методом ( в отношении числа теоретических тарелок), чем ионообменная хроматография, и поэтому работа при комнатной температуре дает удовлетворительные результаты. [33]
![]() |
Пример влияния длины углеводородной цепи ионов-модификаторов на удерживание в ион-парной хроматографии ( с разрешения изд-ва. [34] |
В обращенно-фазовой ион-парной хроматографии органические модификаторы элюента могут влиять как на удерживание, так и на селективность. Изотерму распределения противоионов, а следовательно, и удерживание более всего определяет количество добавленного модификатора. Растворимость ионов-модификаторов в подвижной фазе представляет собой второстепенный фа-ктор. Для растворения в подвижной фазе достаточных количеств больших ионов-модификаторов может потребоваться высокое содержание органического растворителя в подвижной фазе. [35]
Ку велика ( ион-модификатор адсорбирован главным образом на неподвижной фазе), механизм удерживания в ион-парной хроматографии становится аналогичным тому, который имеет место в ионообменной хроматографии. В системах ион-парной хроматографии, используемых на практике, могут играть роль типичные механизмы образования ионных пар, а также и типичные ионообменные механизмы. [36]
Образование комплекса между ионогенным веществом и амфифильным противоионом противоположного заряда может существенным образом изменить удерживание вещества ( удерживание цвитгериона), уменьшить хвост и повысить селективность. Этот принцип лежит в основе ион-парной хроматографии. [37]
ODS) - предназначен для разделения широкого круга веществ от умеренно - до высокополярных. Сорбент пригоден для работы в режиме ион-парной хроматографии. [38]
Выше был описан очень простой механизм ион-парной экстракции. Однако на практике механизм разделения по методу ион-парной хроматографии обычно не является столь простым. [39]
Разбавленные р-ры ионогенных ПАВ в сочетании с нейтральными гидрофобными носителями находят применение в ион-парной хроматографии ( см. Жидкостная хроматография), к-рая отличается высокой эффективностью и большим числом варьируемых параметров для подбора оптим. [40]
Такой же градиент концентрации метанола, но в смеси с 0 05 % - ной ТФУ ( вариант ион-парной хроматографии) использовали для фракционирования на колонке Beckman RP-18 трипсинового гидролизата одного из крупных BrCN-пептидов Азр - тРНК - синтетазы из дрожжей. Отмечается хорошее разделение гидрофобных пептидов. [41]
![]() |
Примеры ионов-модификаторов, используемых в иои-парной хроматографии. [42] |
Иногда также применяют комбинацию двух больших ионов. В образующейся ионной паре заряженные группы могут оказаться спрятанными столь глубоко, что такую пару можно будет экстрагировать очень неполярными растворителями. Такая ситуация представляет больший интерес применительно к нормально-фазовой ион-парной хроматографии, а не обращенно-фазовой, поскольку в первом случае выбор подходящего органического растворителя менее ограничен. [43]
Во-вторых, предполагалось, что оба иона ( X и Y) находятся исключительно в водной фазе. На рис. 3.28 показана схема разделения по методу ион-парной хроматографии, больше соответствующая реальному механизму. [44]
Для разделения соединений этого типа был использован целый ряд методов ЖХ, два из которых представляют особенный интерес, поскольку не требуют предварительной дериватизации. Один из этих методов, основанный на образовании комплексов с металлами, применим лишь к ограниченному кругу соединений. В основу другого, более общего, метода положены два различных варианта хиральной ион-парной хроматографии. В одном из них ахиральный сорбент сочетается с хиральным противоионом ( разделение диастереомерных ионных пар), в другом - хиральный сорбент сочетается с ахираль-ным противоионом ( разделение хиральных ионных пар, см. разд. [45]