Cтраница 2
Раствор 40 г едкого натра в 170 мл воды перемешивают с 60 г порошкообразной целлюлозы ( Solka-Floc) и выдерживают в ледяной бане 30 мин при периодическом перемешивании. Затем порциями прибавляют раствор 35 г перекристаллизованного 2-хлортриэтил-амина в 45 мл воды и нагревают смесь на масляной бане при 80 - 85 в течение 35 мин при постоянном перемешивании. Охлаждают в ледяной бане и порциями прибавляют 250 мл 2 М раствора хлористого натрия. Осадок между операциями промывания основательно спрессовывают и сильно отсасывают, не допуская растрескивания. Выдерживают в течение ночи, загрязненную жидкость декантируют и осадок подвергают декантации 5 - 6 раз, чтобы удалить неосаждающиеся частицы. Затем фильтруют для удаления большей части воды, промывают 500 мл этанола ( тремя порциями) и окончательно промывают абсолютным этанолом, который отсасывают по возможности полнее; остаток удаляют в вакууме. Более крупная целлюлоза ( свыше 325 меш) дает несколько больший выход. [16]
При хроматографировании на целлюлозе колонку ( 2 4 X ХЗО см) заполняют порошкообразной целлюлозой ватман № 1, а затем промывают верхней фазой системы хлороформ-метанол-17 % - ный водный раствор аммиака ( 2: 1: 1) до удаления примесей, которые элюируются в виде узкой окрашенной в желтый цвет полосы. Элюирование ведут нижней фазой со скоростью подачи 2 мл / мин, собирая элюат по фракциям объемом 16 мл. Аликвотную часть каждой фракции наносят в виде пятна на фильтровальную бумагу и проявляют нингидрином. Фракции, содержащие компоненты гентамицина в виде свободных оснований, объединяют и растворитель упаривают досуха. [17]
Смесь кислых продуктов разделяют на колонках с анионитом [115, 180-182], на колонках с порошкообразной целлюлозой [45, 183] с элюэнтом н-бутанол - уксусная кислота - вода ( 2: 1: 1), а также на угольной колонке [184] с элюэнтом водным этанолом. Полученные элюаты концентрируют под вакуумом. Степень чистоты выделенных фракций контролируют методом хроматографии на бумаге. [18]
Липиды отделяют от нелипидных соединений на колонке из порошкообразной целлюлозы следующим образом: из порошкообразной целлюлозы стандартного сорта Ватман готовят суспензию в смеси хлороформа и метанола ( 2: 1, по объему) и помещают ее в колонку размером 30 X 2 см. Колонку промывают растворителем ( около 200 мл) до прекращения элюирования мелких частиц. Не более 500 мг липида вводят в колонку при максимальном объеме смеси хлороформа с метанолом 5 мл. Липиды элюируют примерно 250 мл растворителя. Элюат упаривают почти досуха и остаток метанола удаляют двухкратным добавлением небольших количеств петролейного эфира и испарением почти досуха. Добавляют петролейный эфир, доводя объем экстракта до 15 мл. [19]
Основными видами пористых материалов, применяемыми в тонкослойной хроматографии, являются силикагель, окись алюминия, кизельгур, порошкообразная целлюлоза и целлюлозные ионообменники. [20]
Помещают в колонку неподвижную фазу, в качестве которой применяются такие адсорбенты, как силикагель, окись алюминия, порошкообразная целлюлоза или иониты. В эту колонку вначале вводят раствор смеси веществ, подлежащих разделению, а затем подвижную фазу. В результате сорбции ( или распределения) образуются пространственно разделенные зоны отдельных компонентов смеси, которые извлекают либо после удаления адсорбента из колонны, либо используют различную растворимость компонентов в подвижной фазе. Хроматография на колонке дает возможность очищать и разделять препаративные количества вещества. [21]
Для разделения смеси метилированных Сахаров на колонках с целлюлозой в верхнюю часть колонки диаметром 3 - 4 см, наполненной порошкообразной целлюлозой на высоту 50 см, помещают 1 г сиропа. Колонку промывают метилэтилкетоном, насыщенным водой. Фракции собирают при помощи коллектора, концентрируют, высушивают при комнатной температуре и взвешивают. По весу фракций определяют соотношение метилированных продуктов в смеси. Состав фракций устанавливают хроматографией на бумаге. [22]
Так, еще в 1947 - 1948 гг. было предложено [152-154] этерифи-цировать целлюлозу в виде линтера, древесной целлюлозы или порошкообразной целлюлозы смесью H2S04 либо с алифатическими спиртами ( от метилового до гексилового), либо с серными эфирами этих спиртов. [23]
Представлявшие ранее несомненную ценность методы адсорбционной хроматографии на колонках, заполненных смесью угля и целита [2], а также методы распределительной хроматографии на порошкообразной целлюлозе [3] в настоящее время утратили свое значение в качестве аналитических процедур, но сохранили определенную важность для препаративных целей. [24]
Методы, применявшиеся раньше для очистки орсеина, оказались недостаточно эффективными. Применяя распределительную хроматографию на порошкообразной целлюлозе или на кремнеземе, удалось выделить более 12 компонентов. Метод противоточного распределения Крэйга менее пригоден для препаративного разделения, но очень ценен для установления однородности препаратов, полученных после хроматографической очистки. [25]
Разделение моноз на колонках с целлюлозой происходит в основном за счет процессов распределения и только частично за счет адсорбции. Обычно для разделения, используют порошкообразную целлюлозу или гидроцеллюлозу. [26]
В качестве примера ниже приводится изучение Эндрюсом и сотрудниками строения галактоманнана из семян Trigonella foenum-graecam. Оба сахара были разделены на колонке порошкообразной целлюлозы и дополнительно идентифицированы по оптической активности и температуре плавления. [27]
Хроматография на колонках, заполненных целлюлозой, почти целиком утратила свое значение, и в настоящее время ею пользуются лишь в особых обстоятельствах. В этих случаях применяют главным образом чистую порошкообразную целлюлозу производства фирмы Whatman. Она служит носителем неподвижной фазы. Неподвижную фазу фиксируют на носителе, например посредством пропитки, которую проводят или перед набивкой колонки, или уже непосредственно в колонке. В последнем варианте жидкость, образующую неподвижную фазу, пропускают через заполненную колонку, а избыток пропитывающей жидкости ( неподвижной фазы) вытесняют затем подвижной фазой. Однако предварительно необходимо взаимно насытить обе фазы. [28]
Стеклянную трубку длиной 610 мм и внешним диаметром 15 мм плотно набивают порошкообразной целлюлозой на высоту 510 мм; для поддержки набивки с обеих ее сторон помещают диски с отверстиями. [29]
Эти соединения дают быстро блекнущие светло - или темно-синие пятна на сером фоне. Для дальнейшей идентификации ненасыщенных кислот путем окислительного расщепления их метиловых эфи-ров приготовляют пластинки со слоем порошкообразной целлюлозы с добавкой гипса в качестве связующего. Слой целлюлозы пропитывают 25 % - ным раствором ДМФ в бензоле и сушат 20 мин при комнатной температуре и затем несколько минут при 60 - 70 С. Приготовленную пластинку накрывают стеклом, чтобы не дать испариться пропитывающему соединению. С пластинки с силикагелем, на которой уже провели разделение, ненасыщенные метиловые эфиры элюируют эфиром, элюат концентрируют и наносят в виде пятна на пластинку с целлюлозой. Окисляют ненасыщенные соединения непосредственно на этом пятне смесью 10 мл 0 1 М раствора метапериодата и 10 мл раствора 0 1 М как по карбонату, так и по перманганату калия. Реакцию ведут при 55 - 60 С до тех пор, пока не исчезает розовая окраска, характерная для перманганата калия. Чтобы окисление прошло полностью, эту процедуру повторяют. Продукты окисления ( монокарбоновые кислоты и монометиловые эфиры дикарбоновых кислот) обнаруживают, выдерживая пластинки в парах аммиака и опрыскивая смесью 200 мг метилового красного, 200 мг бромтимолового синего, 100 мл формалина, 400 мл этанола и 3 мл однонормального раствора гидроксида натрия. [30]