Дифосфаты
Cтраница 3
Полирибонуклеотиды были впервые синтезированы Северо Очоа, получившим за эти исследования в 1959 г. Нобелевскую премию вместе с Артуром Корибергом, осуществившим синтез ДНК в бесклеточной системе ( см. разд. Очоа совместно с Грюнберг-Манаго открыл в 1955 г. фермент ( полинуклеотид-фосфорилазу), который в присутствии Mg превращает нукле-озид-5 - дифосфаты в Полирибонуклеотиды. [31]
Каталитических реакциях метаболизма, но отличающиеся по своей природе от белков, довольно многочисленны. Сюда входят металлоком-плексные соединения ( прежде всего порфириновой группы), затем пиридоксальфосфат, катализирующий целую гамму реакций - особенно превращения аминокислот - тиамипирофосфат ( алдольный синтез); биотип ( карбо-ксилирование), гидрофолевая кислота ( перенос одноугле-родных остатков), ряд дегидразных коферментов - ни-котинамидные флавиновые коферменты, АТФ кофермент А ( перенос кислотных остатков), глутатион ( диспропор-ционирование и изомеризация), липоевая кислота ( окислительно-восстановительные реакции), дифосфаты глюкозы, маннозы и глюкозамина ( перенос фосфатных групп), аскорбиновая кислота ( окислительно-восстановительные реакции) и некоторые другие. Все эти коферменты, в свою очередь, построены из небольшого числа структурных элементов, входящих в основной биохимический набор. [32]
Большая часть ферментов функционирует в комплексах с низкомолекулярными кофакторами, коферментами. Такой фермент в целом называется холоферментом, его белковая часть - апо-ферментом. К алифатическому ряду относятся дифосфаты углеводов и их аминопроизводных, участвующие в реакциях переноса фосфатных групп. Среди алифатических кофакторов отметим содержащие серу липоевую кислоту и глутатион. [33]
Она основана на строении и функциональных особенностях коферментов. Большая группа коферментов представляет собой водорастворимые витамины и их химически модифицированные производные. К ним относятся фосфорилированные тиамины, флавин, моно-и дифосфаты, пиридоксалевые, биотиновые, никатинамидные и другие коферменты. Подробно о связи витаминов с ферментами говорится в гл. [34]
Для ортофосфорной кислоты известны средние и кислые соли: МзРС4 - ортофосфаты, М2НРОд - гидроортофосфаты и МН2РОд - дигидроортофосфаты. Кислые соли ортофосфорной кислоты термически неустойчивы и разлагаются, с отщеплением воды и переходом в дифосфаты и метафосфаты. Фосфорные кислоты и их соли содержат фосфор в устойчивой степени окисления V и окислительными свойствами не обладают. [35]
Липосомы предоставляют уникальную возможность собирать на своей поверхности ансамбли молекул для взаимодействия их с белками мишенями. Этот подход используется нами для конструирования препаратов, регулирующих активность комплемента. Для определения оптимального расстояния между заряженными группами и выявления наиболее активной кислотной группы синтезированы дисульфаты, дифосфаты и дикарбоксиметильные производные бисфенолов. [36]
Аликвотную часть ( 10 - 25 мкл) этого раствора, содержащую 0 8 - 1 5 мкг нуклеотидов в 1 мкл, наносят на пластинку с ПЭИ-целлюлозой. Скорость перемещения компонентов щелочного гидролизата РНК уменьшается в следующем порядке: нуклеозиды ( 2 / - 3 - ЦМФ 2 - АМФ3 - АМФ ( 2 - 3 - УМФ) ( 2 - 3 - ГМФ) дифосфаты. Тот же порядок элюирования сохраняется для 5 -изомеров и соответствующих производных, содержащих дезоксирибозу. Особенно четко разделяются компоненты щелочных гидролизатов РНК при восходящей непрерывной тонкослойной хроматографии на ПЭИ-целлюлозе. Для этой цели используют пластинки длиной 17 см, к верхнему краю которых прикреплен фитиль длиной 10 см из бумаги Ватман 3 ММ. Общая продолжительность хроматографии составляет 4 час. Количественное определение веществ на пластинках производят прямым методом ( см. разд. [37]
Природная D ( - Ь) - пантотеновая кислота по своей биологической активности в высокой степени специфична. Как указывалось, ее оптический антипод биологически неактивен; рацемат обладает 50 % - ной активностью. Биологически активны только соли и сложные эфиры пантотеновой кислоты, образованные по карбоксильной группе, например этиловый эфир [4] и др. Сложные эфиры, образованные по гидроксильной группе, например ацетаты [6], бензоаты, а - и f - монофосфаты и дифосфаты [127], неактивны. Таким образом, биологическая активность пантотеновой кислоты проявляется только при наличии обеих свободных гидроксильных групп. [38]
ДЭАЭ-целлюлоза ( диэтилами-ноэтилцеллюлоза) и эктеола-целлюлоза ( приготовляется из алкалицел-люлозы реакцией с эпихлоргидрином и триэтаноламином) с тех пор неоднократно использовались для фракционирования протеинов. Бендих и сотрудники [3, 4], Бредли и Рих [7], а также Клоувен и Вейфенбах [49] применили этот обменник для фракционирования нуклеиновых кислот. Стехелин [83] разделил нуклеозидмонофосфаты, - дифосфаты и - трифосфаты. Петерсон, и Собер [82] провели хроматографический анализ ди - и тринуклео-тидов из дрожжевой рибонуклеиновой кислоты на целлюлозе ДЭАЭ. [39]
ДЭАЭ-целлюлоза ( диэтилами-ноэтилцеллюлоза) и эктеола-целлюлоза ( приготовляется из алкалицел-люлозы реакцией с эпихлоргидрином и триэтаноламином) с тех пор неоднократно использовались для фракционирования протеинов. Бендих и сотрудники [3, 4], БредлииРих [7], а также Клоувен и Вейфенбах [49] применили этот обменник для фракционирования нуклеиновых кислот. Стехелин [83] разделил нуклеозидмонофосфаты, - дифосфаты и - трифосфаты. Стехелин, Петерсон и Собер [82] провели хроматографический анализ ди - и тринуклео-тидов из дрожжевой рибонуклеиновой кислоты на целлюлозе ДЭАЭ. [40]
Смесью микрококковой нуклеазы н фосфодиэстеразы селезенки исследуемую ДНК ( 1 мкг) полностью гидролизовали до З - мононуклеотидов. Затем для последующей локализации пятен и количественных определений мононуклеотиды метили 32Р путем фосфорилирования по 5 -положению рибозы с помощью Т4 - полинук-леотидкиназы и [ у-32. АТР в неорганический фосфат) наносили в угол пластинки PEI-целлюлозы ( 20 X 20 см), которую предварительно вымачивали в течение 30 мин в 0 1 М HCOONH4 ( pH 3 5), а затеи сушили. Механизм разделения здесь также основан на различии зарядов оснований, но хро-матографический процесс протекает намного медленнее, чем в предыдущем примере, поскольку фракционируются дифосфаты. [41]
Фосфофруктокиназу из пекарских дрожжей аллостерически ингибирует АТР. В присутствии АТР увеличивается сигмоидность кривой насыщения фермента субстратом. Очень важно то, что, хотя 5 -трифосфаты инозина, гуанозина и цитозина и могут служить вместо АТР донорами фосфатных групп, они не выполняют ни ингибирующей, ни регулирующей функции. Это означает, что аллостерический центр фермента обладает высокой специфичностью в отношении АТР и что его сигнал однозначен. Напротив, специфичность каталитического центра незначительна. AMP действует как положительный эффектор и снимает торможение, вызываемое АТР. Другие моно - и дифосфаты не действуют совсем или действуют очень слабо. У Escherichia coli роль положительного эффектора играет не AMP, a ADP. Фосфофруктокиназа ингибируется также цитратом; при этом АТР усиливает этот эффект, а фруктозо-6 - фосфат ослабляет его. [43]
Исследованиями этих эфиров занимались также Оливер, Видергорн и Месробиен 77, получая их описанным способом. В качестве гликолей они применяли 1 4-бутиленгликоль, гексаметилендиол-1 6 и декаметилендиол-1 10, а в качестве одноатомных спиртов бутиловый, гексиловый и окти-ловый. Реакция протекает в очень мягких условиях. Образуются соединения, содержащие 0 3 - 0 8 % свободных гидроксильных групп. При построении температурной кривой ползучести таких полимеров заметных различий между отдельными ди-фосфатами гликолей не наблюдается. Отмечено их отличие от трикрезил-и триоктилфосфатов. Они явно превосходят по своему действию трикрезил-фосфат и очень близки триоктилфосфату. Дифосфаты превосходят трикрезилфосфат только по величине относительного удлинения при разрыве. [44]
Для полифосфатов характерна высокая вязкость, электр. Получают их чаще всего дегидратацией кислых ортофосфатов. Гетеропол и фосфат ы - производные ортофосфорной кислоты, в к-рой кислород частично или полностью замещен анионами др. к-т - гетерополиортофосфорные кислоты и их соли, напр. Тет-ратримолибдатоортофосфаты и тет-ратривольфраматоортофосфаты аммония, калия, рубидия и цезия - кристаллические вещества желтого цвета, плохо растворимые в воде, чем пользуются в анализе для определения иона POf - или для отделения рубидия и цезия от остальных щелочных металлов. Полиметафосфаты - соли полиметафосфорных кислот HnPrl03n, где п - 3 - 8 ( эти соли иногда наз. Наиболее изучены три - и тетраметафосфаты. В воде хорошо растворимы только метафосфаты щелочных металлов, аммония и магния. При сильном нагревании полиметафосфаты частично отщепляют фосфорный ангидрид и переходят сначала в дифосфаты, а затем, при более высокой т-ре, в ортофосфаты. Малостабильны полиметафосфаты и в щелочных растворах - происходит расщепление циклов с образованием цепных полифосфатов. Большинство ультрафосфатов ( лития, натрия, калия, кальция, серебра, платины, свинца, кадмия) находятся в стеклообразном состоянии. [45]
Страницы: 1 2 3 4