Гель-хроматография
Cтраница 1
Гель-хроматография как бы дополняет другие хроматографи-ческие методы разделения стероидов. [1]
Гель-хроматография является новым методам разделения, очистки и анализа органических соединений. Поскольку разделение смесей основано на различии в молекулярных весах ее компонентов, с помощью гель-хроматографии можно также определять и молекулярный вес соединений. Благодаря тому что этот метод весьма прост и не требует сложного оборудования, он в короткий срок нашел применение во многих химических и клинических лабораториях. К настоящему времени метод значительно усовершенствован и дополнен многочисленными модификациями, которые позволяют использовать его для работы как на микроуровне, так и в препаративных масштабах. В пограничной области между химией, биологией и медициной гель-хроматография приобрела большое значение как важный технический ( и производственный) метод. Методика, которую первоначально можно было рассматривать лишь как атрибут специализированной биохимической лаборатории, развилась в стандартный хроматографический метод. В настоящее время гель-хроматография применяется всюду, где ставятся задачи разделения или анализа соединений с различными молекулярными весами. [2]
Гель-хроматография имеет сравнительно короткую историю; она насчитывает не более 10 лет, причем именно в последние 6 лет этот метод развивался особенно бурно. [3]
Гель-хроматография позволяет в течение нескольких часов, самое большее за один день, провести разделение полимера на достаточно большое число фракций с постепенно возрастающим молекулярным весом. Техника работы здесь точно такая же, что и при построении кривой. Таким путем Гранат и Флодин [50] впервые с помощью гель-хроматографии определили функцию распределения трех препаратов декстрана. Несколько позже Хойфер и Браун [112] на комбинированном слое ( 1 4x489 см) двух различных этиленгликоль-диметакрилатных гелей препаративно разделили по фракциям образец полистирола ( 200 мг) и на основании молекулярного веса фракций, определенного вискозиметрически, также построили функцию распределения. Полученная кривая хорошо совпадала ( за исключением самой низкомолекулярной области) с кривой, построенной для того же образца на основании фракционированного осаждения. [4]
Гель-хроматография широко применяется при выделении и очистке гормонов передней доли гипофиза. В частности, очисткой на пористых гелях сефадекса был получен высокоактивный гормон роста. Более подробно об этом см. литературу, приложение IV. Другие, менее охарактеризованные белки из передней доли ( см. литературу, приложение V) также могут быть очищены на сефадексе. [5]
 |
Экспериментальные данные по хроматографическому разделению Сиг и Со2. [6] |
Гель-хроматография ( гель-фильтрационная, гель-проникающая, мо-лекулярно-ситовая хроматография) применяется для разделения и анализа высокомолекулярных соединений, а также для отделения к: х от низкомолекулярных веществ. [7]
 |
Экспериментальные данные по хроматографическому разделению Сиг и Со2. [8] |
Гель-хроматография является одним из видов жидкостной хроматографии. При анализе этим методом растворенное вещество распределяется между свободным растворителем и растворителем, находящимся во внутренних полостях пористых частиц наполнителя. Свободный растворитель является подвижной фазой, а пористые частицы, содержащие растворитель, образуют неподвижную фазу. [9]
Гель-хроматография предложена в 1959 г. Поратом и Фло-дином, аффинная хроматография - в 1967 г. Поратом, Аксеном и Эрнбеком. Различные варианты однофазной хроматографии были разработаны Гиддингсом. [10]
Гель-хроматография характеризуется двумя необычными свойствами: 1) подвижная и неподвижная фазы имеют одинаковый состав; 2) в основе разделения лежит скорее размер частиц, чем их химические свойства. Растворенные вещества распределяются между подвижной и неподвижной фазами одинакового состава, из которых одна находится вне пористой набивки, а другая - внутри ее. Молекулы растворенного вещества, размеры которых слишком велики, чтобы они могли проникнуть в поры набивки, элюируются без задержки с удерживаемым объемом, равным мертвому объему и объему подвижной фазы. Молекулы меньшего размера проникают через неподвижный растворитель в поры набивки и элюируются с большим объемом удерживания. Замечательное качество метода состоит в том, что самые большие молекулы имеют наименьшие коэффициенты разделения, а самые малые - максимальные. В результате получают две основные фракции с молекулами меньше и больше, чем размер пор. Более селективные разделения возможны в тех случаях, когда размеры молекул близки к размерам пор. [11]
Гель-хроматография, кроме простоты и быстроты, имеет дополнительное преимущество: не требуется выделять белок в чистом виде, так как примеси других белков не мешают определению, поскольку каждый из них проходит через колонку со свойственной ему скоростью, определяемой молекулярной массой. Это обстоятельство широко используется в этимологии, когда оказывается возможным определение молекулярной массы даже очень небольшого количества фермента в присутствии других белков, не обладающих аналогичной каталитической активностью. [13]
Гель-хроматография применяется для анализа тяжелых нефтяных остатков, кипящих при температурах выше 400 С, котельных топлив, для анализа которых другие методы непригодны. [14]
Гель-хроматография, или эксклюзионная - хроматография - еще один вариант жидкостной хроматографии, при котором молекулы разделяемой пробы элюируют в зависимости от их объема и формы. Заполнитель колонки ( гель) имеет поры определенного размера. Если в разделяемом образце есть молекулы, размеры которых не позволяют им проникать в поры геля, то они проходят с потоком элюента только между частицами геля и быстро выходят из колонки. [15]
Страницы: 1 2 3 4