Cтраница 1
Гель-электрофорез проводится в агарозном или полиакриламидиом геле. [1]
Гель-электрофорез использовали для изучения нуклеотидной последовательности ДНК генома до тех пор, пока не были открыты рестриктазы. В первом случае образуются фрагменты с тупыми концами, содержащие только спаренные нуклеотидные остатки, а во втором - с липкими, которые представляют собой небольшие участки одноцепочечной ДНК. Этот раздел посвящен разделению таких фрагментов. [2]
Гель-электрофорез проводится в агарозном или полиакриламидиом геле. [3]
Метод гель-электрофореза всякий раз ставит экспериментатора перед выбором: либо, используя концентрированный гель, добиться высокого разрешения нуклеиновых кислот с относительно небольшой молекулярной массой, либо в геле низкой концентрации с невысоким разрешением разделить высокомолекулярные соединения. Поэтому для каждого конкретного набора молекул приходится принимать некое компромиссное решение. [4]
Теория гель-электрофореза ДНК в настоящее время не завершена; здесь мы ограничимся простейшими оценками. Для этого будем предполагать, что персистентная длина двойной спирали ДНК намного больше размера ячейки той сетки, сквозь которую осуществляется форез. Этот предельный случай не всегда отвечает реальности, но его разбор полезен для прояснения общей ситуации. Вместе с тем он очень прост, так как соответствует совпадению контура цепи с примитивным путем: из-за жесткости ДНК не может образовывать петли, выходящие из трубки в соседние ячейки сетки. [5]
В гель-электрофорезе смесь заряженных макромолекул разделяется в результате различия в их заряде, размере и скорости миграции через гель, помещенный в электрическое поле. При этом на элск-трофорстичсскую миграцию молекул оказывает влияние матрица геля и, 1 юзтому достигается селективное разделение молекул по размерам. Гели на основе крахмала, агарозы или силикагсля используют в первую очередь для стабилизации зон. Макропористые гели, особенно гели агара и агарозы, наиболее широко применяют в методе иммунпэлектрофореза. Особенностью этого метода является обработка смеси белков раствором антисыворотки после проведения электрофоретического разделения. Антисыворотка содержит в себе специфические антитела, воздействующие на индивидуальные компоненты смеси белков. Антигены и антитела, взаимодействуя между собой, оседают, образуя линии осаждения, каждая из которых должна соответствовать определенному белку. Иммуноэлскт-рофорсз позволяет про водить идентификацию белков серологачес-ким и физико-химическими методами. Полиакриламидный гель химически весьма инертен. Его слабое сродство к красителям позволяет быстро обнаруживать биополимеры ( белки, нуклеиновые кислоты) по цветным реакциям. [6]
При гель-электрофорезе РНК в качестве денатурирующего агента обычно используют мочевину. [7]
Классический электрофорез ( гель-электрофорез или электрофорез на бумаге) имеет две характерные особенности. [8]
STRP-локусы выявляют с помощью гель-электрофореза после проведения ПЦР с использованием праймеров, комплементарных уникальным последовательностям, фланкирующим данный локус. [9]
Одно из серьезных ограничений гель-электрофореза как метода выделения специфических фрагментов ДНК заключается в том, что молекулы, имеющие примерно одинаковую массу, но различную нуклеотидную последовательность, обладают, как правило, одинаковой электрофоретической подвижностью. Один из возможных подходов к решению этой проблемы основан на использовании предложенного в работе Фишера и Лермана [115] метода двумерного гель-электрофореза фрагментов ДНК. Разделение проводят при повышенной температуре. В этой методике использован эффект резкого уменьшения электрофоретической подвижности в результате денатурации или плавления части нативной молекулы ДНК. В ходе электрофореза во втором направлении фрагменты ДНК подвергаются воздействию все более жестких денатурирующих условий, и плавление части молекулы двухцепочечной ДНК сопровождается скачкообразным изменением ее подвижности. [10]
Широко применяемый для изучения биополимеров метод гель-электрофореза основан на различной подвижности макромолекул и их фрагментов в электрическом поле. Для разделения и исследования белков гель-электрофорез производится с доде-цилсульфатом натрия ( ДСН), который связывается с молекулой белка, вызывая ее денатурацию. [11]
ДНК, отличающихся числом сверхвитков, методом гель-электрофореза. [12]
Для разделения белков и нуклеиновых кислот широко применяется метод гель-электрофореза. Его принцип заключается в следующем. Находящиеся в буферном растворе макромолекулы обладают некоторым суммарным электрическим зарядом, и когда через гель пропускают электрический ток, они перемещаются в электрическом поле. Молекулы одинакового размера ( и одинакового заряда) движутся единым фронтом, образуя в геле дискретные невидимые полосы. Чем меньше размер молекул, тем быстрее они движутся. Постепенно исходный препарат, состоящий из разных макромолекул, разделяется на зоны, распределенные по длине пластинки. [13]
Полное аналитическое разрешение всех рибосомных белков достигается с помощью двумерного гель-электрофореза в денатурирующих условиях. [14]
Здесь невозможно в краткой форме описать все применяемые в гель-электрофорезе нуклеиновых кислот приемы; приведем лишь основные ссылки на литературу, где описаны необходимые детали: Методы разделения нуклеиновых кислот и олигонуклеотидов: Gould И. [15]