Гель-электрофорез
Cтраница 3
Именно с помощью гель-электрофореза была точно определена энергия, которая может быть запасена в ДНК с помощью сверхспирализации. [32]
Электрофорез на геле и крахмале применяют для аналитических целей. Наиболее важным применением гель-электрофореза является иммуноэлектрофорез. Для этого вида анализа используют макропористые гели, в частности гели агара и агарозы. Метод иммуноэлектрофореза основан на том, что после разделения электрофорезом происходит диффузия разделенных веществ - антигенов - в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. Навстречу этим соединениям диффундируют антитела. При соединении антигенов и антител образуются характерные дуги осаждения. Метод иммуноэлектрофореза очень чувствителен при обнаружении антигенов, специфических для данных антител. В настоящее время применяют метод введения радиоактивной метки в антигены, благодаря чему радиоиммуноэлектрофорез является одним из самых чувствительных методов анализа биополимеров. [33]
Аналогично осуществляется и электрофорез на ацетат-целлюлозных мембранах и в гелях, дающий, однако, лучшее разделение и пригодный для фракционирования больших количеств исходного материала. Подвижность молекул при гель-электрофорезе оказывается пропорциональной логарифму молекулярной массы. [34]
Это явление, называемое гель-электрофорезом ДНК, лежит в основе плодотворного экспериментального метода: поскольку скорость движения ( точнее, подвижность) сильно зависит от длины и других свойств макромолекулы, то полидисперсная смесь цепей ДНК после некоторого времени электрофоретического движения разделяется на практически монодисперсные фракции, пространственно локализованные в разных участках геля; это исключительно ценно для решения ряда молекулярно-биологических задач. [35]
Широко применяемый для изучения биополимеров метод гель-электрофореза основан на различной подвижности макромолекул и их фрагментов в электрическом поле. Для разделения и исследования белков гель-электрофорез производится с доде-цилсульфатом натрия ( ДСН), который связывается с молекулой белка, вызывая ее денатурацию. [36]
Отпечаток пальцев ( DNA fingerprint) Набор рестрик-ционных фрагментов ДНК, характерный для данного индивидуума. Для получения отпечатка используют либо гель-электрофорез как таковой, либо в сочетании с ПЦР-амплификацией. [37]
 |
Гель-хроматография на колонке с сефадексом ( схема. [38] |
Одним из наиболее распространенных методов фракционирования белков ( как и методов оценки гомогенности) является диск-электрофорез ( от англ, discontinuous - прерывистый, перемежающийся) в полиакриламид-ном геле, при котором используют пары буферных растворов с различными значениями рН и разной степени пористости гель. Следует отметить высокую разрешающую способность гель-электрофореза. Если при электрофорезе белков сыворотки крови человека на бумаге открываются всего 6 фракций, то при электрофорезе в крахмальном геле - 10, а в полиакрил-амидном геле-до 18 разных белковых фракций. [39]
 |
Образование цвиттер-иона. [40] |
При любом данном рН различные аминокислоты имеют слегка различающиеся суммарные заряды и поэтому, если наложить электрическое поле, будут двигаться к одному из электродов с разными скоростями. На этом основано их разделение методом гель-электрофореза ( гл. [41]
Обычно большинство ферментов в процессе изоэлектриче-ской фокусировки не теряют своей активности, исключение составляют лишь некоторые металлсодержащие ферменты. При обнаружении ферментов методами, применяемыми в гель-электрофорезе, может потребоваться добавка соответствующего буфера, чтобы нейтрализовать влияние амфолитов. [42]
В идеальном случае все четыре расщепления регулируют таким образом, чтобы получать один разрыв на цепь ДНК. Это далее позволяет идентифицировать основания прямым анализом авторадиограммы гель-электрофореза четырех одновременно исследуемых образцов. [43]
Моно - и олиногуклеосомы можно выделить, например, центрифугированием в градиенте сахарозы продуктов расщепления хроматина нуклеазой. Еще более тонкое фракционирование хро-матиновых частиц получают с помощью гель-электрофореза, при котором разделяются нуклеосомы с разной длиной линкера или различающиеся по белковому составу. [45]
Страницы: 1 2 3 4