Cтраница 3
Раньше всего, в начальных стадиях варки, в щелоке обнаруживается арабиноза в соответствии с первоочередным гидролизом гликозидных связей арабофуранозных звеньев. [31]
Определение моносахаридного состава проводится анализом продуктов кислотного гидролиза или. Состав продуктов кислотного гидролизата анализируется с помощью хроматографии или электрофореза на бумаге. Нередко используется коммерческий углеводный анализатор, разделение осуществляется на ионообменных смолах методом распределительной хроматографии в водно-спиртовой смеси или в виде боратных комплексов Сахаров. Скорость гидролиза гликозидных связей, образованных остатками нейтральных, амино - и дезокси-сахаров, различна. Легче всего отщепляются остатки сиаловых ( N-ацетилнейраминовой, N-гликолилнейраминовой) кислот, труднее всего расщепляются связи, образованные остатками а ми носа ха ров и уроновых кислот. Фуранозиды гидролизуются значительно быстрее пиранозидов. В итоге при гидролизе олигосахарида может иметь место неполное расщепление связей или кислотная деструкция образующихся моносахаридов, что искажает результаты анализа. НО, 80 С, 18 ч) - в этом случае образуются метилгликозиды, устойчивые к кислотной деструкции. Качественный и количественный состав продуктов метанолиза определяется методом газожидкостной хроматографии в виде триметилсилильных или трифторацетильных производных. [32]
Однако результаты кинетического исследования гидролиза небольших субстратов свидетельствуют о том, что более предпочтительным является согласованный механизм с участием донора и акцептора протона или комбинированный механизм с участием донора протона и нуклеофила. Было установлено, что лизоцим способен катализировать реакцию трансгликозилиро-вания. Это свойство фермента легло в основу способа синтеза п-нитрофенил-р-ц - глюкозида и соответствующего олигомера. Поскольку лизоцим катализирует гидролиз гликозидных связей, вблизи которых ацетил аминогруппы отсутствуют, можно заключить, что анхимерное содействие со стороны N-ацетиламиногруппы не является непременным элементом механизма ферментативного расщепления гликозидных связей. Границы активного центра лизоцима точно не определены, однако ясно, что его размеры должны быть велики, поскольку фермент способен взаимодействовать с гексасахаридами, и, кроме того, кинетика реакции сильно зависит от длины сахаридного субстрата. Особенно убедительно выглядят данные, свидетельствующие об образовании оксокарбониевого иона и участии в катализе глутаминовой кислоты Glu-35. Сохранение конфигурации аномерного центра позволяет заключить, что если оксокар-бониевый ион возникает в ходе катализа, то его пространственное строение жестко фиксируется ферментом. [33]
Растительные камеди являются в основном высокоразветвленными полисахаридами, содержащими остатки гексуроновых кислот в солевой форме и ряд остатков нейтральных моносахаридов, которые часто этерифицированы. Камеди могут образовываться самопроизвольно или при повреждении коры или плодов, выделяются в виде вязких жидкостей, которые застывают в виде стеклообразной массы и защищают места повреждения от микроорганизмов. Многие камеди находят промышленное применение в качестве загустителей или стабилизаторов эмульсий. Для определения строения камедей используют разницу в скоростях гидролиза различных гликозидных связей, получая путем избирательного распада олигосахариды, структура которых может быть установлена более легко и точно. Наиболее часто проводят аутогидролиз ( нагревание кислой камеди в водном растворе), мягкий гидролиз 0 01 М кислотой для отщепления L-арабинофуранозных звеньев, гидролиз 0 1 - 0 5 М кислотой или продолжительный аутогидролиз для разрушения более лабильных связей между остатками гексо-пираноз и жесткий кислотный гидролиз 0 5 М серной кислотой для отщепления всех моносахаридных остатков за исключением гексо-уроновых кислот, что приводит к выделению кислых олигосахари-дов, в частности дисахаридов, содержащих один остаток гексуро-новой кислоты. Распространению камедей в природе и их экстракции посвящены обзоры [101 -103]; во многих случаях приведено троение индивидуальных представителей этого класса соединений. [34]
Внешние воздействия, например повышение температуры, добавле-ние органических растворителей и другие, приводят к изменению макроструктуры. При гидролизе в достаточно мягких условиях отдельные полинуклеотидные цепи могут распадаться на нуклеотиды. Последние далее отщепляют при действии растворов щелочей фосфорную кислоту и превращаются в соответствующие нуклеозиды. Наконец, в присутствии кислот может протекать также и гидролиз гликозидных связей с образованием 2-дезок - cn - D-рибозы и гетероциклических азотистых оснований. [35]
Изучение переходного состояния имеет важнейшее значение не только для органической химии. Все биохимические процессы фермент - субстратного взаимодействия также протекают через активированный комплекс. Специфичность биохимических процессов обусловлена не тем, что субстрат и фермент строго соответствуют друг другу как ключ и замок, такое соответствие приводило бы лишь к комплексообразованию с минимумом энергии для системы. Как показал Кошланд, подобное соответствие является индуцированным, оно возникает в момент взаимодействия фермента и субстрата и сопровождается деформациями молекул. Так, гидролиз гликозидной связи лизоцимом сопровождается изменением конформации пиранозы в полукресло: только такая конформация соответствует стереохимии реакционного центра фермента. [36]