Cтраница 2
Раствор ферментов глюкозооксидазы и пероксидазы ( 5 - 6 мл глюкозооксидазы, соответствующих 500 - 600 ед. [16]
Раствор фермента глюкозооксидазы [ на аналитических весах отвешивают 0 1 г препарата глюкозооксидазы ( активность 216000 ед. Объем жидкости доводят до метки дистиллированной водой при 20 С. Если активность фермента больше или меньше указанной, то соответственно увеличивают или уменьшают навеску препарата. [17]
В одной из работ, посвященных анализу некоторых ферментов, в частности а-глюкозидазы, роданезы и глюкозооксидазы, Лленадо и Реч-ниц [664] использовали автоматизированную систему, включающую в качестве датчиков ион-селективные мембранные электроды. По сравнению с колориметрической установкой Ауто-Аналайзер эта система имеет ряд преимуществ. Во-первых, электроды индифферентны к оптическим свойствам пробы, во-вторых, отсутствует необходимость подвергать пробу диализу для удаления коллоидных частиц. Точность анализа очень высока, а методика достаточно проста, и в режиме непрерывного анализа можно проводить до 20 определений в час. Автоматизированную систему и предложенную авторами методику легко применить к анализу многих ферментов, если выбрать подходящие чувствительные электроды и реакции, позволяющие получить такое производное анализируемого соединения, к которому селективны электроды. [18]
Ферменты, связанные с энзакрилами, выпускаются фирмой Koch-Light Labs, и включают сс-амилазу, каталазу, а-химотрипсин, декстраназу, глюкозооксидазу, трипоин, уреазу и уриказу. [19]
Полезность создания непрерывных автоматических проточных систем, в которых использовались электроды, селективные к ионам цианида [ см. уравнения (XI.28) и (XI.23) ] и иодида [ см. уравнение (XI.7) ], продемонстрирована на примере определения активности р-глюкозидазы, роданезы и глюкозооксидазы. [20]
Глюкозооксидазу помещают на обоих катодах, но так как один из них нагревают выше 7 СС [3], то происходит потеря активности энзима и катод становится нечувствительным к глюкозе. [21]
Большое значение имеет глюкозооксидаза грибов, так как она позволяет пищевым продуктам освобождаться от остатков глюкозы и молекулярного кислорода и этим повышает сроки их хранения. Глюкозооксидазу добавляют к яичному порошку, к майонезу, к пиву при его длительном хранении. С помощью этого фермента замедляется окисление аскорбиновой кислоты при обработке им овощей и фруктов. Применение ферментов облегчает получение глюконовой кислоты. [22]
При понижении температуры выпадает больше осадка, но его ферментативная активность соответственно уменьшается. Для глюкозооксидазы это уменьшение незначительно. [23]
При 10 - 5 М ингибирует аминокислотные декарбок-силазы, а также у-аминобутират-а-оксоглутараттрансаминазу, сериновую и треониновую дегидратазы. Ингибирует глюкозооксидазу по неизвестному механизму. Аналогичное ингибирова-ние происходит под действием многих карбонильных реагентов, которые взаимодействуют с пиридоксальфосфа-том. [24]
В электродах первого типа глюкозооксидаза химически связывалась с полиакриламидом, тонкий слой которого закрепляли с помощью кольца между платиновым электродом и пленкой целлофана. В системе второго типа глюкозооксидаза механически удерживалась у электрода матрицей из полиакриламидного геля. [25]
Количество глюкозы в опытных пробах рассчитывают по калибровочному графику. Ввиду того что сернокислый цинк и щелочь частично ингибируют глюкозооксидазу, пробы со стандартным раствором глюкозы обрабатывают так же, как и опытные. Объем проб доводят дистиллированной водой до 3 мл, в контрольную пробу ( без глюкозы) вносят 3 мл дистиллированной воды. Осадок гидроокиси цинка удаляют центрифугированием или фильтрованием. Из каждой пробы отбирают по 0 5 мл раствора в чистые и сухие пробирки, приливают по 0 5 мл дистиллированной воды и по 3 мл рабочего реактива, перемешивают и фотометрируют развившуюся синюю окраску при 630 нм. [26]
Поскольку многие ферменты производят или используют протоны, возможно, что такое их действие могло бы модифицировать активности других ферментов и таким образом регулировать метаболические дуги. Гестрелиус и др. [14] использовали модельную систему, содержащую включенные гексокиназу, глюкозооксидазу и трипсин. После добавления субстрата трипсина его гидролиз приводит к накоплению протонов в микроокружении утилизирующих глюкозу ферментов. [27]
Ферментный электрод, чувствительный к глюкозе, используется для измерений в неперемешиваемых растворах. Основу его составляет иодид-селективный мембранный электрод, на поверхность которого нанесен тонкий слой смеси иммобилизованных глюкозооксидазы и пероксидазы. В результате возникает градиент активности иодида в приэлект-родном слое по отношению к активности в объеме раствора. Наличие градиента концентрации обусловливает диффузию иодида к электроду, и при постоянной концентрации в объеме раствора в системе устанавливается стационарное состояние. [28]
Мультиферментные системы важны не только теоретически, но и практически. Так, было показано [4], что для препаративного производства глюконовой кислоты из глюкозы более выгодно использовать двухферментную систему - глюкозооксидазу и катала-зу, совместно иммобилизованных на одних частицах носителя-по сравнению с ними же, но иммобилизованными на разных частицах. В этом случае преимущество заключается в локальном обогащении субстратом каталазы - кислородом. [29]
Ногин и др. [513] предложили ферментный электрод специально для определения глюкозы в крови. Этот электрод выполнен на основе рО2 - электрода Кларка, активная поверхность которого покрыта мембраной из ацетатной целлюлозы, пропитанной гелем, содержащим глюкозооксидазу. Для данного количества фермента и в присутствии избытка кислорода потребление последнего определяется только количеством глюкозы в пробе. Ферментный электрод фактически измеряет снижение парциального давления растворенного кислорода после введения глюкозы в реакционную среду. [30]