Cтраница 3
Следует отметить, однако, что общепринятое понятие абсолютная специфичность в определенной степени условно. Так, глюкозооксидаза, специфически окисляющая D-глюкозу с образованием глюконовой кислоты, действует еще по крайней мере на 8 - 10 субстратов, таких, как манноза, мальтоза, лактоза и др. Учитывая тот факт, что скорость окисления этих субстратов ниже по сравнению с глюкозой примерно на два порядка, этими данными зачастую пренебрегают и глюкозооксидазу считают ферментом, проявляющим абсолютную специфичность. Вместе с тем исследования влияния фермента на близкие по строению субстраты оказались чрезвычайно плодотворными в другом отношении. Выяснилось, что на скорость ферментативной реакции влияет не только природа атакуемой связи, но и ее окружение, а также длина углеродной цепи субстрата. Это особенно характерно для ферментов, проявляющих относительную, или групповую, специфичность. [31]
С помощью глюкозооксидазы можно предохранить многие пищевые продукты от окисления с поверхности; в связи с этим фермент используют при упаковке сыров, мяса, кофе. Сыр покрывают специальной пленкой, смоченной ферментным раствором, защищая его таким образом от проникновения кислорода, окислительных изменений, в частности от темного окрашивания в верхних слоях. Мясо заворачивают в фольгу, пропитанную реакционной смесью и содержащей глюкозооксидазу - это помогает сохранению его естественного цвета. [32]
Возможно использование и других типов физических ответов. Например, для реакций, сопровождающихся образованием или расходованием 02, могут быть сконструированы оптические биосенсоры. В качестве примера такого сенсора может служить концевая часть оптического волокна, покрытая двойной пленкой, состоящей из флуоресцирующего порфиринового красителя, заплавленного в полистирол, и соответствующей оксидазы, например глюкозооксидазы. По оптическому волокну к исследуемому образцу, в который погружен биосенсор, подводится возбуждающее излучение и по нему же отводится к флуориметру испускаемое излучение. Интенсивность флуоресценции порфирина понижается в присутствии 02, и таким образом, может быть соотнесена с концентрацией 02 в слое, находящемся в непосредственном контакте с биосенсором. Расход 02, обусловленный присутствием окисляемого соединения, приводит к уменьшению концентрации 02 в слое, прилегающем к пленке, содержащей порфирин, воздействуя таким образом на интенсивность флуоресценции. [33]
Реакцию останавливают внесением 1 0 мл 10 н серной кислоты, затем добавляют 1 0 мл 0 02 М раствора молибдата аммония. После каждого добавления растворы перемешивают. Через 20 мин измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре при длине волны 415 нм. Измерение оптической плотности растворов проводят в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм по отношению к раствору сравнения не содержащего глюкозооксидазу. [34]