Тепловая денатурация

Cтраница 1

Тепловая денатурация ДНК приводит также к весьма резкому уменьшению величины двойного лучепреломления и увеличению угла ориентации в ее растворах [115-119, 122], что указывает на переход к более свернутой конформации молекул и на уменьшение степени их внутренней упорядоченности при нарушении биспиральной структуры Уотсона - Крика. Количественные данные о динамооптических свойствах макромолекул ДНК в денатурированном состоянии практически отсутствуют. Несколько более полная ( хотя далеко еще не достаточная) информация, имеющаяся для нативных образцов ДНК, будет рассмотрена позднее. [1]

Тепловую денатурацию ДНК с высоким содержанием ГЦ-пар можно проводить, кроме того, в буфере, в котором концентрация солей в 10 раз меньше, чем в SSC ( 0 1XSSC); для этого образцы ДНК ( которые обычно хранят в SSC) разбавляют в 10 раз дистиллированной водой. [2]

Поскольку тепловая денатурация ДНК происходит за несколько секунд, столь медленное нагревание необходимо главным образом для устранения градиентов температур. В величину поглощения при 260 ммк вводят поправку на разбавление раствора за счет увеличения его объема при вы-гоких температурах; в табл. 1 приведены отношения объема воды при различных температурах к объему при 25; пользуясь этими величинами, можно вычислить истинную величину поглощения при любой данной температуре. [3]

Схема защитного действия лиофильного коллоида. [4]

Процесс тепловой денатурации необратим. [5]

При тепловой денатурации ДНК происходит резкое необратимое увеличение активности ионов натрия. Изменение степени связывания катионов в очень узком интервале температур совпадает с аналогичными изменениями оптической плотности и оптического вращения. [6]

На тепловую денатурацию белковых веществ влияет продолжительность действия тепла. [7]

В отношении тепловой денатурации растительные белки отличаются большей устойчивостью по сравнению с белками животного происхождения. Кислоты и щелочи ускоряют денатурацию. [8]

Среднюю точку кривой тепловой денатурации принимают за температуру перехода, или температуру плавления, и обозначают Тпп. [9]

Экспериментальные исследования тепловой денатурации ДНК производились в большом числе работ ( обзоры этих работ см., например, в монографии [29] и обзорных статьях jia, зо, 3i ]) g качестве примера на рис. 39 изображена температурная зависимость ультрафиолетового поглощения ( при X яь 260 мм к) ДНК из зобной железы теленка в солевом водном растворе. [10]

ДНК, подвергнутая тепловой денатурации, часто оказывается более эффективной, чем кативная ДНК. В обоих случаях синтезируется двухцепочечная ДНК. [11]

Хотя действие излучения не аналогично тепловой денатурации, все же между обоими явлениями имеется тесная связь. Фрике [79, 80] показал, что относительно малые дозы рентгеновских лучей ( 33000 р) не вызывают немедленно заметных изменений свойств яичного альбумина, но они ускоряют тепловую денатурацию. Результаты его работы показывают, что образование разрывов в полипептидных цепях может быть обнаружено только при повышении температуры, когда процесс развертывания специфической белковой структуры происходит с повышенной скоростью. Существование скрытых разрывов подтверждается низкой энергией активации этого процесса. [12]

Более детальное изучение [237] тепловой денатурации ДНК показало, что быстрое изменение вязкости происходит при специфической температуре плавления и сопровождается большим уменьшением средней непрерывной длины молекулы, однако, по данным светорассеяния, никаких изменений в молекулярном весе при этом не происходит. [13]

То, что после тепловой денатурации ДНК является однотяжной, было показано также несколько иным методом. В случае РНК из опухоли Леттрэ - Эрлиха наклон кривой ( 0 86) указывал на наличие однотяжной структуры; в случае ДНК в течение первых 30 мин наклон кривой был 1 1, а затем уменьшался, но двухцепочечной структуры при 95 для ДНК вообще не было обнаружено. Следует заметить, что изучение кинетики ферментативного гидролиза ДНК, денатурированной нагреванием, может привести к ошибочным выводам. Действительно, двухспиральные структуры, которые заново образуются при охлаждении ( либо из одной и той же, либо из различных цепей), могут оказаться достаточно устойчивыми, и кинетика их гидролиза будет сходна с кинетикой гидролиза двухцепочечной ДНК дезоксирибонуклеазой. [14]

Па скорость и интенсивность процесса тепловой денатурации оказывают большое влияние рП раствора и добавление электролитов. Быстро и наиболее полно белки свертываются в изоэлектрической точке. Сдвиги рП в кислую и щелочную стороны затормаживают процесс осаждения белков. В сильно кислых и сильно щелочных растворах осаждения белков при кипячении практически не происходит. При добавлении кислот молекулы белка заряжаются положительно, в щелочных растворах они приобретают отрицательные заряды. [15]

Страницы: 1 2 3 4 5