Cтраница 3
Зависимость хим. сдвига и констант ССВ от строения молекул - оенова конфирмационного анализа, изучения взаимного влияния атомов в молекуле ( см. Индуктивный эффект, Мезомерный эффект), сольватации и др. эффектов. Температурные изменения формы линий ЯМР и их числа позволяют определять кинетич. Практически используемые значения Н0 - от 0 5 до 14 1 Тесла ( соотв. ЯМР для Н - от 20 до 600 МГц); самые большие Но нужны для исследования структуры белков в р-рах. [31]
Форма ССВ-мультиплетов позволяет определять также изомерный состав в-ва. Температурные изменения формы линий ЯМР и их числа позволяют определять кинетич. ЯМР для Н - от 20 до 600 МГц); самые большие Но нужны для исследования структуры белков в р-рах. [32]
Однако на примере ряда ферментов, и рибонуклеазы в частности, было показано, что не вся молекула, а лишь некоторая ее часть ( активный участок) ответственна за каталитическую активность. Так, Ричарде, используя фермент субтилизин, расщепил молекулу рибонуклеазы по связи между звеньями 20 н 21 ( пептидная связь Ala - Ser), и при этом вторичная и третичная структуры удержали молекулу как целое. Но при хроматографии на кислом ионообменнике короткий пептид из 20 аминокислотных остатков отделился от остальной части. Обе части молекулы были лишены ферментативной активности, однако при смешении их активность вновь возникала. У отделенной большей части белковой молекулы еще сохранилась способность связывать обычный для рибонуклеазы субстрат ферментативной реакции, но не расщеплять его. При гидролизе рибонуклеазы карбоксипептидазой и отщеплении с С-конца трех аминокислот - ва-лина, серина и аланина активность рибонуклеазы не страдает. При гидролизе пепсином разрывается четвертая связь с С-конца и отщепляется кроме валина, серина и аланина еще и аспарагиновая кислота. Тогда остаток рибонуклсазы полностью теряет активность. Сказанное имеет целью дать понятие об исследовании структуры белка как фермента. [33]
Однако на примере ряда ферментов, и рибонуклеазы в частности, было показано, что не вся молекула, а лишь некоторая ее часть ( активный участок) ответственна за каталитическую активность. Так, Ричарде, используя фермент субтилизин, расщепил молекулу рибонуклеазы по связи между звеньями 20 и 21 ( пептидная связь Ala - Ser), и при этом вторичная и третичная структуры удержали молекулу как целое. Но при хроматографии на кислом ионообменнике короткий пептид из 20 аминокислотных остатков отделился от остальной части. Обе части молекулы были лишены ферментативной активности, однако при смешении их активность вновь возникала. У отделенной большей части белковой молекулы еще сохранилась способность связывать обычный для рибононуклеазы субстрат ферментативной реакции, но не расщеплять его. При гидролизе рибонуклеазы карбоксипептидазой и отщепления с С-конца трех аминокислот - валина, серина и аланина активность рибонуклеазы не страдает. При гидролизе пепсином разрывается четвертая связь с С-конца и отщепляется кроме валина, серина и аланина еще и аспарагиновая кислота. Тогда остаток рибонуклеазы полностью теряет активность. Сказанное имеет целью дать понятие об исследовании структуры белка как фермента. [34]