Исследование - фермент
Cтраница 1
Исследование ферментов является по необходимости изучением свойств белков. Все известные общие свойства, присущие белкам, характерны и для ферментов. Но молекулы ферментов обладают еще и особыми, присущими только им свойствами, благодаря которым они могут катализировать специфические реакции. [1]
Результаты исследований ферментов свидетельствуют о том, что авитаминоз, развивающийся у морских свинок при содержании их на С - и Р - дефицитной диете, сопровождается значительным ( в 1 5 раза) повышением активности церулоплазмина сыворотки крови и одновременно снижением активности цитохромоксидазы ( 0 43 до 0 35 ед. Если исходить из того, что полифенолы способствуют ферментативному окислению А К [7], то такое повышение активности церулоплазмина можно представить как результат йриспособителъной реакции организма, направленной на повышение активности аскорбиноксидазы [8], которая способствует переходу АК в ее активную транспортную дегидроформу. Активность окислительно-восстановительных процессов прл скорбуте снижается. [2]
При исследовании ферментов широко используются реагенты и метаболиты, меченные тритием, поскольку они позволяют работать при низком уровне радиоактивности, обеспечивающем безопасность лабораторного персонала. Важное преимущество соединений, меченных тритием, состоит в том, что эти соединения можно сравнительно легко получать при помощи метода Вилцбаха, основанного на изотопном обмене водорода между соединением, которое требуется для эксперимента, и газообразным тритием. Методика введения тритиевой метки сводится к тому, что соединение помещают в атмосферу газообразного трития с очень высокой удельной радиоактивностью и выдерживают в ней в течение длительного времени. После этого радиоактивное соединение освобождают от легко обменивающихся атомов трития путем его растворения в каком-нибудь гидроксил-содержащем растворителе. Поскольку введение тритиевой метки при помощи метода Вилцбаха может приводить к частичному разрушению соединения, рекомендуется после введения метки подвергнуть это соединение тщательной очистке. [3]
Выделение и исследование животных ферментов проводилось исторически раньше, чем растительных, а особенно, чем микробных. Поэтому и способы производства высокоочищенных препаратов разработаны лучше всего для ферментных белков животного происхождения. Следует заметить, что очистка и разделение микробных белков представляют собой гораздо более трудную задачу, чем животных. Неудивительно, что наиболее совершенные способы производства, например более простые и надежные способы кристаллизации, известны для ферментов именно животных тканей. [4]
В большинстве случаев исследования неочищенных ферментов приходится для измерения их концентрации использовать непрямые методы, суть которых будет изложена ниже. [5]
Рекомендуется применять гистохимические методы исследования ферментов в тканях и клетках в сочетании с биохимическими определениями активности тех же ферментов в сыворотке крови. Угнетение первых в сочетании с повышением активности вторых может свидетельствовать о начавшемся процессе разрушения клеток. Некоторые авторы рекомендуют гистохимические исследования для прямого обоснования ПДК, что представляется не всегда убедительным без дополнительных функциональных исследований. [6]
Этот метод предназначен для анализа и исследования ферментов, гормонов и других амфолитов, представляющих интерес для биологов. Разделение соединений основано на различии их изоэлектрических точек. Амфолиты перемещаются по такому слою до тех пор, пока не достигнут такого места, где рН равен их изоэлектрической точке. В этом месте они концентрируются в виде резко очерченной зоны. [7]
 |
Определение Км и Vmsx методом двойных обратных величин.| Определение Км и Vm, методом Эди-Хофсти. [8] |
Константа Михаэлиса имеет большое значение при исследовании ферментов; она является весьма важным параметром, характеризующим, в частности, степень сродства фермента к субстрату. [9]
Данная частица была зарегистрирована независимо при исследовании ЭПР-спектров фермента [64], что служит одним из подтверждений справедливости предложенной кинетической схемы и механизма. [10]
Поставленные задачи решаются на основе современных методов исследования ферментов. Практическая направленность занятий связана с освоением различных методов регистрации скоростей ферментативных реакций, включающих использование сопряженных ферментных систем и метода радиоактивного анализа. С целью определения активности мембранных ферментов осваиваются техника получения различных субклеточных структур и приемы работы с различными типами детергентов. [11]
В настоящее время, хюяако-кинетический подход нашел широкое применение при исследовании ферментов - кинетических элементов биосистем ИгЗК Общие представления о кинетической роли ферментов впервые оыли сформулированы Михаэлисом и Мелтеном [ 33, Они предположили, что молекула, подвергающаяся реакции ( субстрат S) обратимо адсорбируется на определенных местах Е фермента, образуя стабильный комплекс SE фермент-субстрат, последапкщий распад этого комплекса с образованием продуктов реакции является лиштируадей стадией процесса. [12]
Специальные физические методы, при-мен емые в респирометрии и при исследовании ферментов, привлекают большое внимание исследователей и в настоящее время довольно широко распространены. [13]
Изотопы железа Реи Ре, кобальта ЦСо и меди ЦСи служат для исследования ферментов в организмах людей и животных. Эги изотопы используются также в металлургии. Кроме того, ЦСо находит широкое применение при лечении рака и других злокачественных опухолей, с успехом заменяя дорогостоящий радий. [14]
Отрицательная неоперативность впервые была обнаружена Конвоем и Кошландом в 1968 г. при исследовании фермента гли-церальдегид-3 - фосфат дегидроденазы. Позднее отрицательная коо-перативность была обнаружена и у других ферментов. На рис. 20 изображены три кривые, характеризующие процент насыщения N ферментов субстратами в зависимости от их концентрации. [15]
Страницы: 1 2 3