Исследование - фермент
Cтраница 2
В последние годы различные виды ион-селективных электродов - обычные стеклянные электроды, твердые гомогенные электроды, электроды на основе жидких ионообменников или нейтральных комплексов-переносчиков и электроды, чувствительные к газам - начали применять и при исследовании ферментов. [16]
Многочисленные примеры демонстрируют, каким образом биологически активные вещества, связанные с нерастворимыми матрицами, используются в аффинной хроматографии. Исследование ферментов, связанных с нерастворимыми матрицами, так же как и их применение, тесно связано с аффинной хроматографией. [17]
Естественно, приведенные здесь объяснения могут служить только указаниями на вероятность адекватности предложенных подходов. Исследования ашюстерических ферментов при низких концентрациях эффектора и с параллельными измерениями времени конформацион-ной релаксации белка после присоединения эффектора могут привести к экспериментальному подтверждению концепции. [18]
Уэстли стремится по возможности связывать формальные ( кинетические) механизмы ферментативных реакций с химией катализа, и в этом, несомненно, большое достоинство его книги. Примеры исследований конкретных ферментов, хотя выбор их нередко носит в известной мере субъективный характер, достаточно убедительно иллюстрируют эту связь. [19]
Однако следует учитывать, что при разбавлении буфера уменьшается ионная сила, а потому при разбавлении, например, фосфатного буфера он делается более щелочным. При многих исследованиях ферментов следует иметь в виду, что ионная сила в буферном ряду с изменяющимся рН должна быть известна или должна быть постоянной. У одноосновных буферных кислот, таких как уксусная кислота, это практически достигается тем, что концентрация соли остается постоянной и изменяется только концентрация кислоты. [20]
 |
Основные элементы системы для хроматографического определения в атмосфере инертного газа. [21] |
Некоторые ферменты инактивируются при концентрировании или лиофилизации. Из этого можно сделать вывод, что исследование фермента должно начинаться с изучения его стабильности в различных средах. [22]
 |
Конструкция проточной ячейки для непрерывного анализа в потоке. [23] |
Обычно для слежения за определенной химической реакцией достаточно одной такой ячейки, однако в некоторых случаях приходится соединять последовательно две ( или более) ячейки. Так, например, приходится поступать при исследовании ферментов с несколькими активными центрами. При этом ячейки соединяют термостатируемыми спиралями. Поглощение света в ходе реакций с участием ферментов измеряется в двух или трех временных интервалах и результаты измерений обрабатываются при помощи компьютера. [24]
Практически доказано, что картезианский водолаз является прибором, который может получить исключительно широкое применение. Он был использован не только для изучения клеточного дыхания очень малых систем, но также при исследованиях ферментов, в процессе которых имели место изменения объема газовой фазы. Кроме того, картезианский водолаз может быть использован для проведения ультрамикровзвешивания ( см. гл. Картезианский водолаз может быть применен как для измерения клеточного дыхания систем, содержащих единичную клетку, так и для исследования значительно больших систем. Он был использован также для изучения многих микробиологических систем [31 ] и, безусловно, в будущем должен найти более широкое применение. Для метода картезианского водолаза характерна не только возможность его широкого применения, но также высокая чувствительность. По сравнению с другими методами он несколько более сложен в работе и так же, как все очень тонкие методы, приводит к различным ошибкам, которые всегда следует правильно оценивать, вводя соответствующие поправки. [25]
Молекулярное строение белков удалось выяснить только недавно. Первый рентгеноструктурный анализ белка, миоглобина, был завершен в 1959 г., а структура первого фермента, лизоцима, была установлена в 1964 г. Исследования крупных ферментов, переносчиков электронов и антител, быстро прогрессируют. В настоящее время известна подробная картина молекулярного строения более 90 белков. В этой области биохимия незаметно переходит в родственную науку, молекулярную биологию. [26]
Основополагающие законы кинетики ферментативных реакций были установлены уже в начале XX в. Было постулировано, что реакции протекают при прямом контакте фермента и веществ, претерпевающих ферментативное превращение - субстратов, и было выведено простейшее кинетическое выражение для скорости такого превращения - уравнение Михаэлпеа-Ментен. Исследования ферментов показало, что катализируемые ими реакции чрезвычайно чувствительны к условиям протекания, таким, как температура, ионная сила и pll среды. Поэтому в § 6.2 будет затронут и вопрос о влиянии рН и температуры. Кроме того, многие, не подвергающиеся химическому превращению вещества оказывают либо ускоряющее, либо замедляющее действие на ферментативный процесс. Поэтому в этой главе рассматриваются также вопросы об активации и ингпбнровании ферментативных процессов. [27]
Многие другие ( водорастворимые) белки мышц также обладают ферментативной активностью. Можно, таким образом, считать, что более 50 % мышечных белков является белками-ферментами. Сходная картина была обнаружена при исследовании ферментов других тканей и органов. [28]
Это свойство - особенность карбоангидразы, так как больше ни один из известных ферментов не ингибируется этими соединениями так же специфично. Поскольку эти ингибиторы сыграли очень важную роль в физико-химических и энзимологических исследованиях фермента, разд. Хотя по своей природе сульфамиды не являются агентами, связывающими металлы в комплекс, последние данные свидетельствуют о том, что в молекуле фермента центр связывания сульфамидов содержит ион цинка в качестве одной из координирующих групп. [29]
Элоди), показавших, что ряд важных ферментов гликолиза - альдолаза, дегпдрогеназа фосфоглицерпнового альдегида - усиливают свое действие при добавлении в среду некоторых неводных растворителей ( диметилформампда), специфически воздействующих на третичную структуру белков ( см. стр. Этот результат показывает, что изучение ферментативного катализа в водных растворах может и не вскрыть максимальной потенции фермента как катализатора определенной реакции. При всем том изучение кинетики ферментативной реакции является наиболее общим методом исследования ферментов. [30]
Страницы: 1 2 3