Калибровка - колонка
Cтраница 2
 |
Хроматограмма легких газов. [16] |
После заполнения колонки сорбентом ее калибруют при тех же температуре и скорости потока газа-носителя, какие применяют в условиях анализа. Калибровка колонки 1, заключающаяся в определении времени удерживания водорода, воздуха, окиси углерода и метана, производится следующим образом. В колонку, заполненную алюмосиликатом и предварительно продутую аргоном, вводят 1 мл эталонной смеси газов, снимают хроматограмму и определяют время удерживания каждого компонента. За время удерживания принимают время, прошедшее от момента ввода образца в колонку до момента, отвечающего максимуму пика компонента, зафиксированного на диаграммной ленте. [17]
Поэтому для определения молекулярной массы глобулярного белка достаточно определить объем его элюции с предварительно откалиброванной колонки. Калибровку колонки проводят, пропуская через нее белки с известной молекулярной массой и определяя объемы элюции для каждого из них. [18]
Много внимания уделяется проблеме применения универсальной калибровочной кривой для полиолефинов. В этом случае для калибровки колонок необходимы очень узкие фракции полиэтилена и полипропилена, которые трудно синтезировать. Следовательно, представляется целесообразным калибровать колонки по хорошо изученным, коммерчески доступным. Калибровочная кривая, построенная по фракциям полистирола, была преобразована в калибровочную кривую для полиэтилена и полипропилена; при этом совпадение данных находилось в пределах ошибок опыта. [19]
Разработаны методики, успешно связывающие неразрешенную огибающую хроматограмму с выражением моле-кулярновесового распределения через калибровочную кривую. Предпочитаемый подход заключается в прямой калибровке колонок для ГПХ узкими стандартами известного молекулярного веса. Когда такие стандарты недоступны, обычно связывают молекулярный вес образца с длиной вытянутой полимерной цепи через так называемый Q-фактор. Этот способ [31], хотя и допускает отклонение, используется широко, так как он прост в применении и позволяет установить требуемые соотношения при отсутствии точных калибровочных стандартов. [20]
Для калибровки колонок необходимо наличие серии соединений с известной молекулярной массой или достаточно хорошо охарактеризованных узких фракций полимеров, которые, кроме того, должны иметь структурное сходство с исследуемыми веществами, что иногда создает дополнительные трудности при анализе углеводов. В отсутствие подходящих стандартов для калибровки колонок при анализе мо-лекулярно-массового распределения других полисахаридов часто применяют декстраны фирмы Pharmacia. Однако следует подчеркнуть, что при анализе полисахаридов, структурно отличающихся от декстранов, на результаты калибровки можно опираться при условии, что соотношение между молекулярной массой и молекулярным размером исследуемого полимера имеет тот же порядок, что и для декстрана. Универсальная калибровка, в основе которой лежит определение зависимости между Ve и IgM-JT ] ] ( где [ TJ ] - истинная вязкость, которая служит мерой гидродинамического объема молекулы в растворе) [127], может быть использована только в случае достаточно длинной полимерной цепи. Несмотря на непрекращающиеся попытки [ 129, 1301 найти некую общую зависимость, справедливую для всех полисахаридов, калибровку колонок по охарактеризованным фракциям исследуемого полисахарида, видимо, не удастся заменить. Выделение узких фракций для определения их характеристик ( такими методами, как ультрацентрифугирование, светорассеяние и др.) требует применения препаративной СЭХ, которую раньше считали медленным процессом. Однако появление в последнее время сорбентов, которые могут быть использованы в условиях высокоскоростной жидкостной хроматографии, должно в значительной степени сократить время подобного рода препаративного фракционирования. [21]
Объем газа в волюмометре 19 отмечают при включенном секундомере через каждые 30 сек, не поднимая уравнительной склянки. Через некоторое время, определенное при калибровке колонки, начинается выделение водорода, которое замечают по движению непоглощаемых щелочью пузырьков газа по всей высоте волюмометра. Когда полностью выделится водород, объем щелочи в волюмометре перестает изменяться. После этого, также при определенном калибровкой времени, начинает выделяться азот ( или воздух), затем метан. [22]
Поскольку элюентный объем в ГПХ является функцией не только ММ, но и других параметров макромолекул, используемая калибровочная зависимость справедлива лишь при условии структурной и химической однородности калибровочного и анализируемого образцов во всем исследуемом интервале молекулярных масс или при одинаковой зависимости параметров неоднородности от ММ. Если для данного олигомера это условие выполняется, то калибровка колонок может быть осуществлена любым методом, в том числе с помощью универсальной калибровочной зависимости. В противном случае следует избегать косвенных методов и проводить калибровку с помощью узких фракций исследуемого образца, охарактеризованных по ММ. [23]
Вследствие полидисперности приходится рассматривать средне-меленное и среднемассовое значение молекулярной массы ( М л Mw), которые определяют различными абсолютными и относительными методами, причем отношение ( Mw. Позднее к ним добавили гель-проникающую хроматографию я жидкостную хроматографию высокого давления с калибровкой колонок по подходящим стандартам или по результатам ультра-центрифугирования выделенных фракций. Характерным свойст-зом лигнинов в растворах является их низкая вязкость. [24]
Вследствие полидисперности приходится рассматривать средне-численное и среднемассовое значение молекулярной массы ( М и Mw), которые определяют различными абсолютными и относительными методами, причем отношение ( Mw. Позднее к ним добавили гель-проникающую хроматографию и жидкостную хроматографию высокого давления с калибровкой колонок по подходящим стандартам или по результатам ультрацентрифугирования выделенных фракций. Характерным свойством лигнинов в растворах является их низкая вязкость. [25]
Следовательно, каждую колонку необходимо калибровать для каждой партии адсорбента. В стандартном методе, принятом в 1970 г. [45], подробно описана процедура калибровки колонки индивидуальным углеводородом, искусственными смесями и реальными экстрактами воздушных загрязнений, которые обычно содержат примеси, мешающие анализу. [26]
Концентрацию полимера в растворе, вытекающем из колонки, определяют спектроскопически, рефрактометрически или посредством осаждения растворенного полимера. Для установления связи между элюирующим объемом и молекулярной массой, зависящей от природы полимера, характеристик геля и многих других факторов, проводят калибровку колонки по образцам полимера с точно известными молекулярными массами. Зависимость логарифма молекулярной массы от элюирующего объема ( как правило, почти линейная) служит для калибровочной кривой при исследовании молекулярно-массовых распределений. [27]
Как правило, получают линейные калибровочные кривые типа приведенных на рис. 5 - 5, если строят зависимость логарифма молекулярного веса фракций с достаточно узким распределением по молекулярным весам от элюирующих эти фракции объемов прошедшей через колонку жидкости. Полимеры различной структуры на одной и той же колонке обычно дают ненесколько отличающиеся друг от друга калибровочные кривые. Кроме того, калибровка колонки по одному полимеру в различных растворителях часто приводит к набору кривых, сходящихся в области низкомолекулярных фракций. Такое положение неудивительно, поскольку размеры полимерных клубков увеличиваются в термодинамически хороших растворителях, а при снижении молекулярного веса различия в гидродинамических объемах уменьшаются. [28]
Для большинства инсектицидов наблюдается очень быстрая гибель насекомых - примерно от 100 мкг. Такой способ обычно бывает проще и быстрее, чем проведение серии химических анализов. Другой способ, упрощающий калибровку колонок, заключается в добавлении к экстракту небольшого количества пестицида, меченного радиоактивным изотопом. Этот экстракт хроматографи-руют, собирают фракции, выпаривают их и с помощью счетчика, указывающего радиоактивность, находят фракции, в которых содержится пестицид. [29]
Обратной величиной относительного объема элюирования является константа удерживания R-V0 / Ve. Ее используют для сравнения относительных скоростей, которые характеризуют поведение соединений при разделении в тонком слое. Отношение Ve / Vt очень легко рассчитать. Vt определяют посредством калибровки колонки до ее заполнения. [30]
Страницы: 1 2 3