Cтраница 3
Последующие этапы анализа проводятся стедующим образом: после кисютного гидролиза в виде радиоактивно меченного полиола идентифицируется моносахарид, находившийся на восстанавливающем конце цепи. Далее путем восстановления моносахаридов NaB H, и анализа смеси образующихся радиоактивно меченных альдитов определяется моносахаридный состав. Последовательность моносахаридов устанавливается с помощью экзогликозидаз: уменьшение молекулярной массы радиоактивно меченного олигосахарида, о котором судят по данным гель-фильтрации на биогеле Р-4. Наконец, анализ положения гликозндных связей проводится обычным образом с помощью метилирования. На различных этапах анализа широко практикуется сравнение с заведомыми образцами олигосахаридов. [31]
Альдозы и кетозы под действием кислот и оснований изомери-зуются и распадаются с образованием различных продуктов. Можно предположить, что за такую неустойчивость ответственна потенциальная карбонильная группа, так как альдиты в этих условиях значительно стабильнее. [32]
Альдопиранозы и альдофуранозы, все гидроксильные группы которых ( за исключением группы при С-1 и С-4 или С-5, участвующих в образовании полуацетального цикла) защищены бензильными группировками, легко получить бензилированием и последующим гидролизом альдозидов. Подобные бензилированные альдозы при обработке боргидридом натрия или алю-могидридом лития гладко восстанавливаются в1 соответствующие частично бензилированные альдиты. Так, из 2 3 5-три - О-бензил-о - араби-нофуранозы образуется 2 3 5-три - О-бензил-о - арабинит, а из 2 3 4 6-тет-ра - О-бензил-а - о-глюкопиранозы - 2 3 4 6-тетра - О-бензил-о - глюцит. Если затем селективно защитить первичную гидроксильную группу, лишь вторичная гидроксильная группа останется доступной для окислителя. После проведения окисления защитные группировки удаляют и получают кетозу, у которой кетогруппа находится при атоме углерода, соответствующем С-4 или С-5 исходной альдозы. Следует отметить, что из бензилированных гексофураноз образуются 3-гексулозы. Кроме того, если восстановление проводить бортритидом натрия или алюмотрити-дом лития, образуется кетоза, меченная по терминальному углеродному атому ( см. гл. В рассмотренном ниже синтезе для защиты первичной гидроксильной группы используется тритильная группа, однако, кроме нее, могут с успехом применяться и некоторые другие группировки. Если же такая группа не затрагивается при гидрогенолизе и устойчива к действию слабых кислот, продуктом синтеза будет кетоза с заместителем при терминальном атоме углерода. [33]
Поскольку некоторые альдиты представляют промышленный интерес, восстановление альдоз в больших количествах проводят либо каталитическим гидрированием, либо электролитически в щелочной среде. В последнем случае еще до восстановления наблюдается значительная эпимеризация альдоз и обычно получается смесь альдитов. [34]
Если в образце содержится гексуроновая кислота, способная лактонизоваться в кислой среде, то перед восстановлением необходимо этот лактон омылить. В противном случае лактон восстанавливается боргидридом натрия до соответствующего альдита, и, таким образом, в смеси появляется дополнительное количество альдитов, что приводит к искажению результатов определения альдоз. Омыление проводят за 20 мин до добавления боргидрида натрия, приливая к гид-ролизату разбавленный раствор карбоната натрия. [35]
Объемистые заместители, уменьшающие торсионный угол между связями С-О в виц-лио-лах ( или искажающие углы между связями у атома углерода, в результате чего происходит сближение атомов кислорода), повышают прочность водородной связи. Сходным образом такие заместители благоприятствуют связанным теисг-конформерам ( 162) в некоторых циклогександиолах-1 4 с уменьшением доли несвязанных структур, имеющих конформацию кресла. Преимущественные конформации альдитов как в кристаллическом состоянии [376], так и в водном растворе [377] в большой степени определяются тенденцией углеродного скелета к вытянутой, плоской, зигзагообразной форме, за исключением тех случаев, когда такое расположение приводит к отталкивающим 1 3-взаимодействиям параллельных связей С-О. [36]
В остальном реакция проводится, как описано выше. Последняя методика предпочтительна в тех случаях, когда в образце присутствуют альдиты с низким молекулярным весом, например этиленгли-коль и глицерин. Большинство смесей альдитов можно разделить на значительно более коротких колонках. [37]
В кислой среде они окисляются периодатом с образованием формальдегида, который определяют по реакции с пентандионом-2 4 в растворе ацетата аммония. Избыток периодата предварительно восстанавливают арсенитом. В условиях анализа при окислении большинства альдитов образуется с высоким выходом формальдегид, в то время как при окислении большей части аль-доз формальдегид образуется лишь в незначительных, с трудом детектируемых количествах. Исключение составляет о-фруктоза, ее можно достаточно точно определить этим методом. Периодат-формальдегид-ный метод в совокупности с орциновым используется для анализа сложных смесей Сахаров и альдитов. Точность его сравнима с точностью орцинового метода. [38]
Для масс-спектрометрического исследования применяются моно - и олигосахариды в виде летучих производных, например метиловых эфиров, ацетатов, изопропилидеповых производных и др. При этом каждая категория производных Сахаров характеризуется определенными закономерностями распада. Интерпретация масс-спектров ациклических производных более проста, чем циклических. В связи с этим часто практикуется преобразование моно - и олигосахаридов в альдиты, реже - в диалкилмеркаптали. [39]
Преимущество его перед другими хроматографическими методами заключается в том, что после проведения разделения сорбент не нужно регенерировать. Каждое соединение дает один пик. Кроме того, рассматриваемый метод выгодно отличают точность количественного определения минорных компонентов смеси, а также возможность анализа сложных смесей Сахаров и альдитов. [40]
Растворы упаривают досуха на роторном испарителе при 40 С. К остаткам приливают по 1 мл метанола и смеси снова упаривают. Чтобы удалить борат-ионы полностью, операцию повторяют трижды. Пробирки плотно закрывают пробками, интенсивно встряхивают, чтобы альдиты растворились в ацетилирующей смеси, и выдерживают 3 ч при 100 С. [41]
Тейхоевые кислоты [1, 2] представляют собой растворимые в воде-высокомолекулярные соединения, содержащие остатки фосфата риби-та или фосфата глицерина. Мономерные звенья в молекуле соединены фосфодизфирными связями. Остатки нейтральных Сахаров или N-аци-ламинодезоксисахаров могут присутствовать либо как заместители, присоединенные к полимерной альдитфосфатной цепи - кору, либо как звенья этой цепи. В последнем случае они связаны с соседними звеньями через фосфодиэфирную группировку. Многие тейхоевые кислоты содержат остатки о-аланина, присоединенные сложноэфирной связью к альдиту или сахарному остатку. Сложноэфирная связь аль-дит-аланин исключительно неустойчива к действию щелочи. [42]
В кислой среде они окисляются периодатом с образованием формальдегида, который определяют по реакции с пентандионом-2 4 в растворе ацетата аммония. Избыток периодата предварительно восстанавливают арсенитом. В условиях анализа при окислении большинства альдитов образуется с высоким выходом формальдегид, в то время как при окислении большей части аль-доз формальдегид образуется лишь в незначительных, с трудом детектируемых количествах. Исключение составляет о-фруктоза, ее можно достаточно точно определить этим методом. Периодат-формальдегид-ный метод в совокупности с орциновым используется для анализа сложных смесей Сахаров и альдитов. Точность его сравнима с точностью орцинового метода. [43]
По окончании гидролиза пробирки охлаждают до комнатной температуры и проводят центрифугирование. Гидролизаты нейтрализуют подходящим карбонатом, например карбонатом бария, если присутствуют сульфат-ионы, или карбонатом серебра, если имеются хлорид-ионы. Осадки отделяют центрифугированием и один раз промывают водой. Суперна-тант и промывные воды объединяют. Последняя операция проводится для омыления лактона уроновой кислоты, который, как отмечалось выше, может восстанавливаться до альдита. Избыток боргидрида натрия разлагают уксусной кислотой. [44]