Диагностикум
Cтраница 3
В качестве АГ в этой реакции используют диагностикумы - взвеси заведомо известных убитых и в отдельных случаях живых микроорганизмов. Диагностикумы из убитых микроорганизмов в - форме весьма устойчивы, не теряют своих свойств в течение нескольких лет и не представляют биологической опасности. [31]
Для результатов РА имеет значение концентрация микробной взвеси, поскольку в реакции необходимо обеспечить правильное и наиболее оптимальное соотношение антигена и антител. Стандартные диагностикумы бактерий кишечного семейства имеют концентрацию 3 млрд, клеток / мл, туляремии - 5, холеры - 5, бруцеллеза 10 млрд, мл по оптическому кишечному стандарту. При постановке пробирочной РА конечная концентрация микробов в пробирках с реакцией должна составлять 500 млн. / 1 млрд, микробных тел в 1 мл. [32]
В качестве диагностикума используют взвесь убитых нагреванием и фенолом бруцелл, окрашенную генциановым фиолетовым или метиловым фиолетовым. Для реакции Райта и Хеддльсона выпускается единый цветной бруцеллезный диагностикум, содержащий антигены трех патогенных для человека бруцелл. [33]
Разработанные варианты тест-систем необходимы для применения в наркологической и судебно-медицинской практике, клинической биохимии. С помощью таких диагностикумов удобно проводить скриннинговые обследования населения. [34]
 |
Схема разведения сыворотка в подсобном ряду пробирок. [35] |
При втором варианте смешивания АГ и AT к разведениям сыворотки, разлитой в пробирки по 0 5 мл, добавляют по 0 6 мл антигена, взятого в концентрации 1 млрд, микробных тел / мл по оптическому стандарту. В результате добавления диагностикума бактерий во всех пробирках объем будет равен 1 мл. [36]
Реакцию сопровождают контролем сыворотки и диагностикума. [37]
Кровь из пальца в виде толстой капли наносят на предметное стекло и добавляют в нее равный объем дистиллированной воды, чтобы вызвать гемолиз. Рядом с кровью помещают каплю туляремийного диагностикума, обе капли смешивают стеклянной палочкой. У больных туляремией в серопозитив-ном периоде ( при титре антител 1: 100 и выше) агглютинация происходит немедленно. У лиц, перенесших туляремию, в течение длительного времени в крови обнаруживаются специфические агглютинины. [38]
На основании полученных результатов разработан комплект нормативно-технической документации по созданию новых отечественных им-мунохимических тест-систем для экпресс-анализа наркотиков в биологической жидкости человека. Комплект документов, представленный в НЦ ЭГТССЛС для проведения приемочных технических испытаний наборов диагностикумов включает: проект технических условий ( ТУ), проект инструкции по применению, проект патентного формуляра, проект карты технического уровны, протокол предварительных испытаний, проект лабораторного регламента. [39]
Самым быстрым и специфическим методом диагностики является постановка внутрикожной пробы с орнитозным аллергеном. В качестве аллергена используется аллантоисная культура мозгового штамма В возбудителя орнитоза или ( лучше) тканевый диагностикум. Предварительно кожу обрабатывают спиртом и подкожно вводят 0 1 мл аллергена на внутренней поверхности предплечья с одновременным контролем на другой руке. Гиперемия и инфильтрат обычно исчезают через 36 - 48 ч, но иногда держатся длительно и даже оставляют бурую пигментацию. [40]
После этого в опытный ряд пробирок, включая и контроль АГ, добавляют по 0 1 мл бактериального диагностикума, который предварительно ресуспендируют встряхиванием. Штатив с пробирками берут в руки или устанавливают в шуттель-аппарат и энергично встряхивают в течение 10 мин. Сразу же после перемешивания во все пробирки заливают по 0 8 мл физраствора и производят учет и оценку результатов РА. Реакцию учитывают в агглюти-носкопе или с помощью лупы. [41]
Благодаря использованию минимального количества АГ ( 2 нейтрализующие дозы) реакция высокочувствительна. Количество нейтрализующих доз в антигенном препарате определяют с помощью РИГА, при этом делают серийные 2-кратные разведения АГ в 1 % - м растворе нормальной сыворотки кролика и в лунки вносят антительный эритроци-тарный диагностикум. Нейтрализующей дозой АГ считают его максимальное разведение, дающее полное склеивание сенсибилизированных эритроцитов. [42]
В лаборатории диагностикум приготовляют путем смешивания нескольких различных типов и штаммов бруцелл мелитензис, абортус бовис и суис. Для этого культуры бруцелл смывают с МПА гипертоническим раствором поваренной соли ( 12 % NaCl) с содержанием 0 25 % карболовой кислоты и приготовляют смесь густотой 20 млрд. Затем взвесь кипятят 10 мин и добавляют к ней 0 10 краски генцианвиолета, получая окрашенный диагностикум. Применение окрашенного АГ позволяет повысить контрастность образующегося агглютината бактерий, что значительно облегчает учет реакции. [43]
Антитела к возбудителям брюшного тифа, паратифов А и В обнаруживаются в сыворотке крови больных с 8 - 10-го дня заболевания. Полученную сыворотку последовательно разводят ( табл. 2.11) в 6 параллельных рядах пробирок от 1: 100 до 1: 1600 и вносят ОН - и О-диагностикумы в пробирки ( в 2 ряда соответственно): брюшнотифозный, паратифозный А и паратифозный В. Для контроля антигена каждый диагностикум в той же дозе вносят в 1 мл ИХН, а для контроля сыворотки используют сыворотку в разведении 1: 100 без добавления диагно-стикумов. С целью получения О-диагностикумов суспензии соответствующих культур кипятят или обрабатывают спиртом; ОН-диагностикумы получают после обработки формалином. [44]
За отчетный период работа, запланированная в рамках настоящего проекта, выполнена полностью. На основе направленного синтеза и наработки специфических иммунохимических реагентов разработаны иммуно-химические методы для экспресс-анализа опиатов, бензодиазепинов, кан-набиноидов в биологической жидкости человека. Приготовлены опытные серии образцов новых диагностикумов. Образцы успешно прошли приемочные испытания. Проведены клинические испытания тест-систем на предмет обнаружения опиатов. Подготовлен комплект нормативно-технической документации и методические рекомендации по созданию промышленной партии систем. Для проведения дальнейших испытаний препаратов и внедрения их в практику клинического обследования населения необходимо продолжение финансирования работ. На следующем этапе предполагается продолжение исследований по разработке и оптимизации метода экспресс-анализа низкомолекулярных наркотиков в биологической жидкости человеа на основе реакции латексной агглютинации. На основе синтеза и наработки специфических иммунохимических реагентов будут разработаны методы изготовления диагностических тест-систем для определения следующих классов соединений - опиатов, барбитуратов, канна-биноидов, кокаина, бензодиазепинов, эфедрона. Приготовлены опытные серии образцов новых диагностикумов, и подготовлен комплект нормативно-технической документации по созданию примышленной партии систем. [45]
Страницы: 1 2 3 4