Cтраница 4
В качестве диагностикума используют взвесь убитых нагреванием и фенолом бруцелл, окрашенную генциановым фиолетовым или метиловым фиолетовым. Для реакции Райта и Хеддльсона выпускается единый цветной бруцеллезный диагностикум, содержащий антигены трех патогенных для человека бруцелл. [46]
В лунки полистироловых планшетов или агглютинационные пробирки вносят по 0 025 мл 1 % - го раствора нормальной сыворотки кролика и делают серийные 2-кратные разведения исследуемого материала. Затем во все лунки добавляют по 0 025 мл иммунной сыворотки, планшет встряхивают и оставляют на 30 мин при 37 С или на 1 ч при комнатной температуре. Далее во все лунки добавляют по 0 025 мл антигенного диагностикума, встряхивают планшет и оставляют на 2 ч, после чего учитывают результаты. [47]
На предметное стекло наносят слева каплю дистиллированной воды и к ней добавляют одну каплю свежевзятой крови больного, перемешивают стеклянной палочкой до просветления ( полного гемолиза) капли крови. В контрольную каплю ( справа) берут одну каплю дистиллированной воды или физраствора и одну-две капли диагностикума. Капли перемешивают как 01бычно с легким подогреванием и через 3 - б мин учитывают результат реакции. [48]
Тщательно обезжиренное предметное сухое стекло размерами 18X24 см расчерчивают восковым карандашом на квадраты величиной 3X3 или 4X4 см. По горизонтали должно быть шесть квадратов. Затем в микропипетку набирают исследуемую сыворотку и последовательно вносят в 5 квадратов, начиная с первого, следующие дозы ее: 0 08, 0 04, 0 02, 0 01, и 0 02 мл. Далее к каждой капле сыворотки ( 1 - 4 квадрат) и в шестой квадрат ( за исключением пятого квадрата) приливают по 0 03 мл диагностикума. Затем в пятый квадрат ( контроль сыворотки) и в шестой ( контроль АГ) добавляют 0 03 мл физраствора. Смеси ингредиентов перемешивают одной стеклянной палочкой последовательно в 6, 4, 3, 2 и 1 квадратах, отдельной - в пятом квадрате. Затем стекло с пробами берут в руки, круговыми покачиваниями продолжают перемешивать компоненты и при этом слегка подогревают смеси в течение 2 - 3 мин, держа стекло высоко над пламенем горелки. Температура стекла с реакциями не должна превышать 45, Ее определяют путем прикосновения тыльной стороны руки к нижней поверхности стекла. При этом все время наблюдают за ходом реакции. В случаях положительной реакции уже в первые минуты появляются в первых квадратах зерна агглютината. [49]
Кроме классического выделения культуры, можно применять укороченные методы диагностики, которые являются ориентировочными. К ним относятся: 1) исследование нативного мазка; 2) метод макроагглютинацин со специфической противохолерной О-сывороткой при доращивании нативного материала на пептонной воде; 3) иммунофлюоресцентная диагностика. Определенное значение имеют серологические методы исследования: обнаружение антител в сыворотке крови больных или носителей ( РА), выделение антигена в испражнениях методом РПГА с эритроцитарпым диагностикумом, сенсибилизированным антителами иммунной холерной сыворотки. [50]
Для диагностики сифилиса выпускают кардиолипиновый антиген для реакции микропреципитации. Этот антиген включает 3 очищенных липида: 0 03 % 1 3-дифосфатглицерина ( кардиолипин), 0 27 % фосфатидилхолина ( лецитин) и 0 9 % холестерина в абсолютном этаноле. Препарат выпускают в ампулах по 2 мл. Инактивированные вирусные диагностикумы используют в реакциях связывания комплемента, нейтрализации и торможения гемагглютинации. [51]