Липкий конец
Cтраница 3
Процедура состоит в следующем. Плазмиду, содержащую эту последовательность, разрезают с помощью Aval и, используя ДНК-полимеразу 1, достраивают липкие концы. [31]
Синтетический двухцепочечный олигонуклеотид с одним тупым концом и одним липким. После пришивания адаптера тупым концом к ДНК-мишени последнюю можно встраивать в подходящий вектор, используя приобретенный ею липкий конец. Синтетический одноцепочечный олигонуклеотид, у которого после самогибридизации появляются липкие концы и внутренний сайт для рестрици-рующей эндонуклеазы. Когда адаптер встраивают в клонирующий вектор, у последнего появляется новый сайт рестрикции. [32]
Очевидно, эндонуклеаза при рестрикции образовала выступающие концы, которые удерживаются вместе за счет собственной липкости. Поэтому ДНК остается в форме кольца, г) Щелочная среда приводит к раскручиванию кольцевой двухцепочечной ДНК и разделению липких концов; в результате образуются две линейные одиночные цепи. Нет; центральная догма молекулярной генетики гласит, что генетическая информация передается от ДНК к РНК и далее от РНК к белку. В РНК-содержащих вирусах генетическая информация также передается в направлении РНК - белок, хотя и без участия ДНК. [33]
Каждая из цепей на одном конце выступает за пределы дуплекса на 12 нуклеотидов. Эти два одно-цепочечных конца комплементарны друг другу; путем спаривания оснований они могут соединяться друг с другом, поэтому их называют липкими концами. [34]
После этого линейную плазмиду, обладающую хвостами, и кДНК просто смешивают и предоставляют им возможность образовать пары между комплементарными основаниями. Среди продуктов такой гибридизации будет находиться увеличенная кольцевая плазми-да, содержащая новый ген, который связан с плазмидой только за счет комплементарного взаимодействия липких концов. Эти концы можно теперь ковалент-но соединить с помощью ДНК-лигазы ( разд. [35]
Проблема проводимости в нанообъектах широко изучается и в связи с исследованиями в области коммутирующих систем в на-ноэлектронике. Нанопроволоки из металлов и полупроводников считаются перспективными для таких наноразмерных устройств, как транзисторы, диоды логические вводы и др. На рис. 4.19 демонстрировалась возможная сборка ( соединение) нанопроволо-чек с помощью липких концов ДНК. [36]
Синтетические декамерные дуплексы такого рода предназначены для присоединения встык к генам ДНК, полученным химически или ферментативно путем связывания лигазами. Когда они затем подвергаются зависимому от последовательности эндонук-леазному действию фермента рестрикции ( см. разд. Поскольку идентичные липкие концы могут быть получены в результате действия того же фермента рестрикции на бактериальную хромосому, то может быть создана возможность для введения искусственного гена в хромосому ( см. разд. [37]
Считают, что кольцевая форма раскрывается под действием эндонуклеазы. Существование липких концов подтверждается не только определением нуклеотидных последовательностей. [39]
Повышение температуры, по их данным, затрудняет элюцию ДНК и растягивает ее профиль. Удается разделить фрагменты длиной 98 и 102 пары оснований, чего далеко не всегда можно добиться с помощью электрофореза. Длина липких концов рестриктов и их состав влияют на разделение, равно как и нуклеотидный состав ДНК и даже последовательность оснований. [40]
 |
Добавление липких концов к фрагменту ДНК, имеющему тупые концы, перед встраиванием ДНК в вектор с целью создания рекомбинантной молекулы ДНК. [41] |
Если для выделения донорной ДНК ( например, методом дробовика) использовали рестриктазу, той же самой рестриктазой должна быть обработана плазмидная ДНК. Рестрикци-онные фрагменты донорной ДНК, среди которых есть и фрагмент с нужным геном, смешивают затем с плазмидной ДНК. При смешивании они соединяются липкими концами. [42]
Синтетический двухцепочечный олигонуклеотид с одним тупым концом и одним липким. После пришивания адаптера тупым концом к ДНК-мишени последнюю можно встраивать в подходящий вектор, используя приобретенный ею липкий конец. Синтетический одноцепочечный олигонуклеотид, у которого после самогибридизации появляются липкие концы и внутренний сайт для рестрици-рующей эндонуклеазы. Когда адаптер встраивают в клонирующий вектор, у последнего появляется новый сайт рестрикции. [43]
Для получения линкеров синтезируют олигомеры, которые представляют собой палиндромные одноцепочечные нуклео-тидные последовательности, спаривающиеся ( гибридизующиеся) между собой. Разрезают новую молекулу нужной рестрицирую-щей эндонуклеазой и получают фрагменты с выступающими одноцепочечными концами ( липкими концами), с помощью которых встраивают ДНК-мишень в соответствующий вектор. Прежде чем проводить встраивание, рестрицированную смесь фракционируют для отделения ДНК с липкими концами от лишних линкерных молекул. ДНК-мишень не должна содержать сайтов рестрикции, присутствующих в линкерной последовательности, в противном случае она также будет расщепляться ферментом. [44]
Концевые повторяющиеся последовательности-структурная особенность нуклеиновых кислот некоторых вирусов и бактериофагов. Например бактериофаг 17 характеризуется двухцепочечной линейной ДНК, в которой начальный участок нуклеотидной последовательности ( 0 7 % всей последовательности нуклеотидов) повторяется на противоположном конце молекулы. Ферментативное отщепление повторяющихся нуклеотидных последовательностей, на обоих концах молекулы ведет к образованию липких концов, которые в необходимых условиях обеспечивают образование кольцевых структур. [45]
Страницы: 1 2 3 4