Cтраница 1
С-Концевые аминокислоты определяют ферментативным методом путем последовательного отщепления аминокислот карбоксипептида. [1]
Выход С-концевых аминокислот в виде свободных аминокислот и в виде ДНФ-производных значительно колеблется в зависимости от условий гидразинолиза. [2]
Анализ N-концевых и С-концевых аминокислот показал, что в эсеи-не и бресеине имеются свободные только 6-аминные группы орнитина: у первого - одна, у второго - две. У эсеина С-концевой аминокислотой является аспарагиновая кислота. У бресеина она отсутствует. Эта-ноламин в продуктах гидролиза не был обнаружен. Биологическая активность эсеина равна / 4 активности грамицидина С, а для бресеина - равна активности грамицидину С ( по Вас. [3]
Для определения С-концевых аминокислот в белках и пептидах используют как химические, так и ферментативные методы. [4]
Отщеплением двух С-концевых аминокислот с помощью карбоксипепти-дазы Y получают / З - казоморфин-5 Tyr-Pro-Phe-Pho-Gly, который обладает большей опиатной активностью, чем гептапептид. [5]
При определении С-концевых аминокислот ферментативным путем используют карбоксипептидазы А, В, С и Y. Карбоксипептидаза А при рН 8 025 отщепляет все аминокислоты кроме лизина, аргинина и про-лина; карбоксипептидаза В при рН 8 0 отщепляет только лизин и аргинин; карбоксипептидаза С при рН 3 5 отщепляет кислые, нейтральные и основные аминокислоты, включая пролин; карбоксипептидаза Y при рН 6 0 отщепляет все С-концевые аминокислоты, включая пролин. [6]
Легче всего отщепляются С-концевые аминокислоты, содержащие ароматическую боковую цепь, за ними следуют аминокислоты с большой алифатической боковой цепью и затем аминокислоты с алифатической боковой цепью меньшего размера. Еще больше уменьшается скорость отщепления при наличии в боковой цепи кислотных или основных групп; С-концевой пролил и ок & ипролин устойчивы к отщеплению. [7]
Что касается изучения С-концевых аминокислот, то единственным достаточно надежным химическим приемом их изучения является метод гидразинолиза. [8]
Поэтому для определения С-концевых аминокислот чаще используют ферментативный метод. [9]
Новым подходом к избирательному отщеплению С-концевых аминокислот явилось применение карбодиимидного метода Хо-рана [52], В очень мягких условиях карбодиимиды ( RN-C-NR) реагируют с N-ацилпептидами с образованием ацилпроизводных мочевины, которые подвергаются интересному разложению в присутствии щелочи. [10]
Химические методы основаны главным образом на модификации С-концевых аминокислот. После полного гидролиза полипептидной цепи эти производные отделяют от немодифицированных остатков и идентифицируют. К химической группе методов относятся гидразинолиз, отщепление С-концевых аминокислот под действием изотиоцианата аммония и восстановление этерифицированных белков и пептидов алю-могидридом лития. [11]
Не существует удовлетворительного химического метода для определения С-концевых аминокислот, но в ряде случаев можно воспользоваться ферментом карбоксипептидазой. [12]
Приведите методы, позволяющие определять N - и С-концевые аминокислоты в полипептиде. [13]
А, В и Y преимуществ венно используются для определения С-концевых аминокислот. Однако пр более длительном воздействии пептидная цепь может быть путем отщеЯ леиия отдельных аминокислот деградирована с С-конца. Для этого необходимы определенные предпосылки. [14]
К сожалению, этот изящный метод имеет ряд недостатков, которые затрудняют изучение С-концевых аминокислот и порядок чередования аминокислотных остатков. Так, скорость отщепления отдельных аминокислот неодинакова. Быстрее всего отщепляются ароматические аминокислоты, затем аминокислоты с длинной алифатической цепью и затем уже с короткой. Очень медленно отщепляются дикарбоновые и диаминокислоты. Совсем не отщепляются пролин и оксипролин. На скорость отщепления влияют и характер соседнего аминокислотного остатка, и общая структура белковой молекулы. Это часто затрудняет интерпретацию получаемых результатов. Например, при одинаковой интенсивности накопления нескольких аминокислот не всегда можно быть уверенным в существовании нескольких полипептидных цепей, если эти кислоты отщепляются с различной скоростью. Поэтому в ряде случаев результаты, полученные с помощью карбоксипепсидазного метода, требуют дополнительной проверки. [15]