С-концевые аминокислота

Cтраница 4

Карбоксипептидаза также обусловливает превращение белков, в результате которого образуются растворимые соединения без заметного изменения молекулярного веса, а иногда и без потери биологической активности. Карбоксипептидаза способна выделять аминокислоты из некоторых белковых субстратов, воздействуя главным образом на С-концевые положения, которые соответствуют ее специфическим структурным требованиям. В течение последних двух лет Карбоксипептидаза исследовалась как возможный общий реагент, пригодный для осуществления контролируемого постепенного расщепления белков и для идентификации С-концевых аминокислот. Этот вопрос рассмотрен в статьях II и III, однако не следует недооценивать преимуществ применения карбоксипептидазы и в исследованиях изменения белков под действием ферментов. [46]

Характерные и аналитически хорошо исследованные места в белках образуют концы пептидных цепочек, аминокислоты которых либо имеют свободную аминогруппу, либо связаны таким образом, что имеется доступная карбоксильная группа. Число свободных а-алшпогрушг и число карбоксильных групп дает имеете с тем число свободных пептидных цепочек в белке, если предположить, что опп не являются пи разветвленными, ни циклическими. Из большого числа методов определения концевых аминогрупп в пептидных цепочках наиболее широко распространен метод Зан-гера ( метод дппитрофепилпропзводпых) и фенилизотиоцианатный метод) дмана ( фенплтмогпдаптоиповый метод) для определения N-копцсвых аминокислот и карбокснпептпдазнып метод для определения С-концевых аминокислот. Идеальное требование, состоящее в определении последовательности всех аминокислот в белке, было до сих пор выполнено лишь в нескольких случаях, в частности для инсулина, полученного из панкреатической железы различных видок животных. [47]

Это необходимо для того, чтобы знать, какой белок подвергается анализу - протомер или олигомер. Олиго-мерные белки предварительно обрабатывают надмуравьиной кислотой для разделения на отдельные полипептидные цепи. TV-Концевую аминокислоту определяют при помощи динитрофторбензола, который реагирует с а-ами-ногруппой белка, образуя окрашенное в желтый цвет производное. Что касается С-концевых аминокислот, то их определение связано с применением ферментативного метода. В качестве фермента чаще всего используют карбокси-пептидазу А, которая последовательно отщепляет от карбоксильного конца отдельные аминокислоты. Суть метода заключается в количественном определении накопления свободных аминокислот во времени. [48]

Определение структуры глутатиопа посредством гидролиза. [49]

Для полного воссоздания первичной структуры полипептида необходимо идентифицировать аминокислоты, которые входят в состав каждого из фрагментов, полученных в результате неполного гидролиза, и решить, в какой последовательности эти аминокислоты соединяются друг с другом в исходном полипептиде. Один из подходов к решению этой проблемы состоит в том, что проводят полный гидролиз фрагментов, идентифицируют составляющие их аминокислоты, а затем осуществляют химический синтез фрагментов. Другой путь - избирательный гидролиз, при котором от фрагмента отщепляют по одной аминокислоте на каждом этапе, чаще всего при помощи ферментов из поджелудочной железы, так называемых карбоксипептидаз. Эти ферменты способны гидролизовать только С-концевые аминокислоты и, следовательно, постепенно разрушать пептидный фрагмент с С-конца. Нередко достаточно бывает проанализировать различные концентрации аминокислот полученных под действием карбоксипептидазы, которая гидролизовала фрагмент в течение постепенно возрастающих промежутков времени, чтобы получить необходимые данные относительно аминокислотной последовательности. [50]

Протеазы выделяют из животных и растительных тканей, плесневых грибов и бактерий. Среди многих ферментов ( эндопептидаз), которые расщепляют внутренние пептидные связи, только трипсин, химотрипсин и пепсин обладают достаточной специфичностью действия, чтобы при их помощи можно было регулировать расщепление белков. Другие ферменты, такие, как субтилизин, протеазы плесневых грибов и бактерий, более пригодны для последующего расщепления больших фрагментов. Лейцинаминопептидазу и кар-боксипептидазу ( экзопептидазы) применяют для отщепления N - и соответственно С-концевых аминокислот ( см. стр. [51]

Страницы: 1 2 3 4