Cтраница 3
Тиролиберин представлен трипептидом, состоящим из пироглутаминовой ( циклической) кислоты, гистидина и пролинамида, соединенных пептидными связями. В отличие от классических пептидов он не содержит свободных NH2 - и СООН-групп у N - и С-концевых аминокислот. [31]
Осадок промывают 5 % - ным раствором трихлор-уксусной кислоты, а затем 3 - 4 раза ацетоном для удаления ее следов. Указанные стадии позволяют удалить свободные аминокислоты, которые могут загрязнять препарат белка, и приводят к денатурации белка, повышающей доступность С-концевых аминокислот к действию карбоксипептидаз. При определении С-концевых аминокислот в пептидах первые стадии необходимо опустить. [32]
Способность этого мощного восстанавливающего агента превращать свободные карбоксильные группы в первичные спиртовые группы была положена в основу попытки Фромажо и др. [24, 25] определить С-концевые аминокислоты инсулина. [33]
При определении С-концевых аминокислот ферментативным путем используют карбоксипептидазы А, В, С и Y. Карбоксипептидаза А при рН 8 025 отщепляет все аминокислоты кроме лизина, аргинина и про-лина; карбоксипептидаза В при рН 8 0 отщепляет только лизин и аргинин; карбоксипептидаза С при рН 3 5 отщепляет кислые, нейтральные и основные аминокислоты, включая пролин; карбоксипептидаза Y при рН 6 0 отщепляет все С-концевые аминокислоты, включая пролин. [34]
Карбоксипептидаза поджелудочной железы отщепляет от пептидов и белков одну за другой С-концевые L-аминокислоты. Освободившиеся С-концевые аминокислоты могут быть определены качественно; если же контролировать реакцию количественно, то в благоприятных условиях удается определить последовательность 2 - 5 аминокислот. Не отщепляются глицин, лизин, пролин; очень быстро отщепляются ароматические аминокислоты и лейцин. Аналогично действует аминопептидаза, которая ступенчато расщепляет пептиды с аминного конца. [35]
Карбоксипептидаза поджелудочной железы отщепляет от пептидов и белков одну за другой С-коицевые L-амшюкнслоты. Освободившиеся С-концевые аминокислоты могут быть определены качественно; если же контролировать реакцию количественно, то в благоприятных условиях удается определить последовательность 2 - 5 аминокислот. Не отщепляются глицин, лизни, пролпп; очень быстро отщепляются ароматические аминокислоты и лепнин. Аналогично действует аминопептидаза, которая ступенчато расщепляет пептиды с аминного конца. [36]
Осадок промывают 5 % - ным раствором трихлор-уксусной кислоты, а затем 3 - 4 раза ацетоном для удаления ее следов. Указанные стадии позволяют удалить свободные аминокислоты, которые могут загрязнять препарат белка, и приводят к денатурации белка, повышающей доступность С-концевых аминокислот к действию карбоксипептидаз. При определении С-концевых аминокислот в пептидах первые стадии необходимо опустить. [37]
Степень рацемизации при реакциях конденсации с М - защи-щенными аминокислотами зависит главным образом от природы используемой N-защитной группы. Блокирование аминогруппы такими защитными группировками ацильного типа, как фор-мильная или трифторацетильная, способствует рацемизации, так как в этом случае очень легко образуются азлактоны. Остатки оптически активных С-концевых аминокислот в М - защи-щенных пептидах рацемизуются почти во всех случаях. Воган [2363] детально изучил реакцию конденсации Cbo-Gly-L-Phe-OH с этиловым эфиром глицина при различных условиях; при этом, в частности, было установлено, что наибольшее влияние на степень рацемизации оказывает природа растворителя. Так, в хлороформе наблюдается полная рацемизация, в тетрагидрофуране рацемизации не обнаружено вообще, а в диоксане она достигает 10 %; степень рацемизации в смеси толуола с хлороформом возрастает с увеличением относительного содержания хлороформа. Более того, было найдено, что степень рацемизации зависит от времени реакции образования смешанного ангидрида: увеличение продолжительности реакции ведет к большей рацемизации. С другой стороны, температура в процессе реакции конденсации с эфирами аминокислот не оказывает столь существенного влияния на процесс рацемизации. Эти наблюдения нашли подтверждение в исследованиях Детерманна и Виланда [ 590а ], которые на том же самом примере показали, что рацемизации не происходит во время образования смешанного ангидрида в тетрагидрофуране при - 15 и при последующей конденсации с амино-эфиром в течение 10 мин. Рацемизация аминокомпонента при конденсации карбобензо-ксиглицина с L-триптофаном в водно-щелочном растворе обнаружена Инглом [1089]; обычно же аминокомпонент не рацеми-зуется. [38]
Степень рацемизации при реакциях конденсации с М - защи-щенными аминокислотами зависит главным образом от природы используемой N-защитной группы. Блокирование аминогруппы такими защитными группировками ацильного типа, как фор-мильная или трифторацетильная, способствует рацемизации, так как в этом случае очень легко образуются азлактоны. Остатки оптически активных С-концевых аминокислот в М - защи-щенных пептидах рацемизуются почти во всех случаях. Воган [2363] детально изучил реакцию конденсации Cbo-Gly-L-Phe-OH с этиловым эфиром глицина при различных условиях; при этом, в частности, было установлено, что наибольшее влияние на степень рацемизации оказывает природа растворителя. Так, в хлороформе наблюдается полная рацемизация, в тетрагидрофуране рацемизации не обнаружено вообще, а в диоксане она достигает 10 % - степень рацемизации в смеси толуола с хлороформом возрастает с увеличением относительного содержания хлороформа. Более того, было найдено, что степень рацемизации зависит от времени реакции образования смешанного ангидрида: увеличение продолжительности реакции ведет к большей рацемизации. С другой стороны, температура в процессе реакции конденсации с эфирами аминокислот не оказывает столь существенного влияния на процесс рацемизации. Эти наблюдения нашли подтверждение в исследованиях Детерманна и Виланда [ 590а ], которые на том же самом примере показали, что рацемизации не происходит во время образования смешанного ангидрида в тетрагидрофуране при - 15 и при последующей конденсации с амино-эфиром в течение 10 мин. Рацемизация аминокомпонента при конденсации карбобензо-ксиглицина с L-триптофаном в водно-щелочном растворе обнаружена Инглом [1089]; обычно же аминокомпонент не рацеми-зуется. [39]
В переваривании нативных белков и продуктов их гидролиза в тонком кишечнике активное участие принимают экзопептидазы. Карбоксипептидазы синтезируются в неактивном состоянии в поджелудочной железе и активируются трипсином в кишечнике. Карбоксипептидаза А гидролизует пептидные связи С-концевых аминокислот, образованные преимущественно ароматическими аминокислотами ( фенилаланин, тирозин, триптофан), а карбоксипептидаза В - связи, в образовании которых участвуют С-концевые лизин и аргинин. [40]
Обработка пептидов или белков гидразином при 100 в течение 3 - 10 часов приводит к расщеплению всех пептидных связей. При этом все аминокислоты, кроме С-концевых, превращаются в соответствующие гидразиды аминокислот, которые с бензальдегидом образуют гидразоны, растворимые в органических растворителях. Это используется для отделения их от С-концевых аминокислот, остающихся неизмененными. [41]
Обработка пептидов или белков гидразином при 101Р в течение 3 - 10 часов приводит к расщеплению всех пептидных связей. При этом все аминокислоты, кроме С-концевых, превращаются в соответствующие гидразиды аминокислот, которые с бензальдегидом образуют гпдразоны, растворимые в органических растворителях. Это используется для отделения их от С-концевых аминокислот, остающихся неизмененными. [42]
Химические методы основаны главным образом на модификации С-концевых аминокислот. После полного гидролиза полипептидной цепи эти производные отделяют от немодифицированных остатков и идентифицируют. К химической группе методов относятся гидразинолиз, отщепление С-концевых аминокислот под действием изотиоцианата аммония и восстановление этерифицированных белков и пептидов алю-могидридом лития. [43]
Гормон роста был открыт в экстрактах передней доли гипофиза еще в 1921 г., однако в химически чистом виде получен только в 1956 - 1957 гг. СТГ синтезируется в ацидофильных клетках передней доли гипофиза; концентрация его в гипофизе составляет 5 - 15 мг на 1 г ткани, что в 1000 раз превышает концентрацию других гормонов гипофиза. К настоящему времени полностью выяснена первичная структура белковой молекулы СТГ человека, быка и овцы. СТГ человека состоит из 191 аминокислоты и содержит две дисульфидные связи; N - и С-концевые аминокислоты представлены фенилаланином. [44]
По размеру молекулы и своим свойствам пептиды стоят между высокомолекулярными белками и аминокислотами. Наиболее распространены линейные пептиды, однако известны также циклические пептиды, молекулы которых могут иметь различные размеры. Циклические пептиды образуются из линейных, когда пептидная связь связывает амино - и карбоксильную функцию N - и С-концевых аминокислот. [45]