С-концевые аминокислота

Cтраница 2

Анализ концевых групп является классическим методом химии белков, в котором N - и С-концевые аминокислоты каждой полипептидной цепи определяются с помощью специфических реагентов или ферментативным гидролизом. Во многих случаях бывает трудно рассчитать число полипептидных цепей на основе анализа концевых групп только потому, что выход концевой аминокислоты после ферментативного гидролиза или химической реакции иногда оказывается очень низким. Другая трудность при идентификации полипептидных цепей с помощью анализа концевых групп заключается в том, что аминогруппа N-концевой аминокислоты может быть заблокирована ацетильной группой. [16]

Подробно изучены две карбоксипептидазы - А и В, относящиеся к металлопротеинам и катализирующие отщепление от полипептида С-концевых аминокислот. Карбоксипептидаза А разрывает преимущественно пептидные связи, образованные концевыми ароматическими аминокислотами, а карбоксипептидаза В-связи, в образовании которых участвуют С-концевые лизин и аргинин. [17]

В природных белках сравнительно мало титруемых свободных СООН - и NH2 - rpynn, поскольку абсолютное их большинство находится в связанном состоянии, участвуя в образовании пептидных связей; титрованию доступны в основном свободные СООН - и NH2 - rpynnbi у N - и С-концевых аминокислот пептида. [18]

Метионина в составе белков содержится обычно меньше, чем других аминокислот, поэтому обработка CNBr предпочтительнее, так как при этом образуется небольшое число пептидов, первичную структуру которых определяют с помощью рассмотренных ранее методов, всякий раз начиная с определения природы N - и С-концевых аминокислот. [19]

С-концевых) полипептидов в форме тиогидантоиновых и фенилтиогидантоиновых производных соответствующих аминокислот. Идентификацию С-концевых аминокислот белков часто можно осуществить путем селективного титрования, которое включает в себя обработку пробы водой 3Н2О в присутствии уксусного ангидрида [144-146]; после критического изучения [146] этого метода было рекомендовано растворять анализируемый белок в 3Н2О с последующим добавлением пиридина и уксусного ангидрида. [20]

С-концевых) полипептидов в форме тиогидантоиновых и фенилтиогидантоиновых 1роизводных соответствующих аминокислот. Идентификацию С-концевых аминокислот белков часто можно осуществить путем селективного титрования, которое включает в себя обработку 1робы водой 3Н2О в присутствии уксусного ангидрида [144-146]; тосле критического изучения [146] этого метода было рекомендо - 5ано растворять анализируемый белок в 3Н2О с последующим добавлением пиридина и уксусного ангидрида. [21]

Катализируют отщепление С-концевых аминокислот в молекулах белков. Продуцируются поджелудочной железой в виде проферментов, активирующихся под действием трипсина; участвуют в пищеварении. Тип А катализирует отщепление преим. [23]

Мягкий гидролиз позволяет сохранить пептидные связи. Процесс можно повторять, последовательно определяя С-концевые аминокислоты. [24]

Другой побочной реакцией при восстановлении пептидов алюмогидридом лития является восстановление пептидных связей до стадии образования спиртов, которые также выделяются в виде динитрофенильных производных. Поскольку эти спирты образуются не из С-концевых аминокислот, их присутствие мешает точному определению структуры пептидов. [25]

Соединения табл. 1 перечисляются таким образом, что при постоянной N-концевой аминокислоте ак варьируется аминокислота х с концевой карбоксильной группой, что дает ряды дипеп-тидов ак-х. Сразу же можно заметить, что порядок С-концевых аминокислот х одинаков для каждого ряда. Более того, в каждом ряду сдвиг соединений характеризуется довольно постоянным фактором. Это дает основание распространить систему относительных времен удерживания на другие дипептиды, относительные времена удерживания которых еще не измерялись, при условии, что в качестве стандарта доступно по крайней мере по одному соединению каждого ряда. Вейганд, Кольб и Кирхнер [23], а позднее также и Томида, Токуда, Охаши и Накаджима [24] использовали для подобных расчетов соответствующий график. Эта система, однако, проще объясняется с помощью индексов удерживания и будет рассмотрена позже. В табл. 2 собраны некоторые триметилсилильные эфирные производные метиловых эфиров N-ТФА-дипептидов, разделявшихся с апиезоновой смазкой в качестве жидкой фазы. [26]

Две карбоксипептидазы - А и В - участвуют в переваривании белков в двенадцатиперстной кишке. Карбоксипептидаза А проявляет максимальную каталитическую активность в отношении ароматических С-концевых аминокислот, а карбоксипептидаза В специфична в отношении основных С-концевых аминокислот. [27]

Реакция с безводным гидразином является единственным химическим методом определения С-концевых аминокислот, который во многих случаях дает достоверные результаты. Два остальных метода - восстановление гидратами металлов и тиогидантоиновый метод - дают, как правило, невоспроизводимые и недостоверные результаты. Метод предложен Акабори в 1952 г. Белок нагревают с гидразином ( безводным) в запаянной ампуле при 100 - 120 в течение 8 - 10 часов. При зтом происходит расщепление белка-гидразинолиз, в результате чего все аминокислоты, кроме С-концевой, образуют гидразиды. Обработкой бензальдегидом гидразиды аминокислот переводят в нерастворимые производные, которые удаляют фильтрованием. Свободные же С-концевые аминокислоты определяют хроматографически. [28]

Видно, что в указанных условиях только одна, а именно С-концевая, аминокислота будет превращаться в сс-аминоспирт, легко идентифицируемый методом хроматографии. Таким образом, при помощи указанных методов определяют природу N - и С-концевых аминокислот. [29]

Гипоталамические гормоны, контролирующие освобождение гормонов гипофиза. [30]

Страницы: 1 2 3 4