Cтраница 2
Описанный выше раствор-сырец оксидазы обладает известными свойствами оксидазы в резко выраженной форме. Одна капля раствора моментально окрашивает гваяковую настойку в темпосиний цвет. Если прибавить 2 см3 раствора оксидазы к раствору пирогаллола, то смесь немедленно окрашивается в коричневый цвет, а по истечении двух часов начинается выделение кристаллов пурпурогалина. Так же энергично и действие оксидазы на гидрохинон. [16]
Все окислительные агенты, вызывающие посинение гваяковой настойки, изменяли окраску спиртовой вытяжки. Все вещества, способные обесцвечивать гваяковую настойку ( например, сероводород), обесцвечивали окрашенную спиртовую вытяжку. Шенбайн сделал вывод, что в ткани гриба содержится хромогенное вещество, способное окисляться озонированным кислородом, подобно веществам гваяковой смолы. Тот факт, что эти вещества в паренхиме гриба не окрашиваются в обычных условиях, свидетельствовал, по его мнению, 6 существовании в ткани другого вещества, могущего активировать атмосферный кислород, делая его способным к окислению. [17]
Если применять слябогипертонические растворы йодистого калия, то наблюдается одновременно синее окрашивание и плазмолиз. С объектами, которые очень медленно окрашивают гваяковую настойку, иодокрахмальная реакция часто-дает отрицательный результат. [18]
В отсутствии перекисей пероксидаза не оказывает ни малейшего окисляющего действия. Свежеприготовленная гваяковая настойка не окрашивается пер-сксидазой; однако гваяковая настойка, простоявшая лишь несколько часов, окрашивается более или менее интенсивно в синий цвет раствором пероксидазы. Как уже было доказано Шенбейном46, пероксидаза активирует перекись водорода не только по отношению к гваяковой настойке, по и к крахмальному раствору с йодистым калием. Она также активирует все перекиси, образующиеся при окислении органических соединений воздухом. Новые данные Линоссье47, Гунгера48, а также Баха и Шода49 только подтверждают наблюдения, сделанные уже Шенбейном. [19]
В то время как действие перекиси водорода на гваяковую настойку ускоряется как гемоглобином, так и пероксидазой, действие ее на йодистый калий ( выделение иода) ускоряется пероксидазой, но совсем не ускоряется гемоглобином. [20]
Наиболее интересным свойством оксидазы из Lactarius, несомненно, является ее способность активироваться пероксидазой, извлеченной из тыквы, таким же точно образом, как перекись водорода. Тот факт, что растворы перекиси водорода, которые сами по себе не вызывают синего окрашивания гваяковой настойки, вызывают это посинение при прибавлении раствора ферментов, известен еще со времен Шеибейна. Эта чрезвычайно чувствительная реакция часто применялась для обнаруживания ничтожных количеств перекиси водорода или фермента. Только в последнее время было установлено, что активация перекиси производится определенным ферментом - пероксидазой. Однако многочисленные исследователи, которые изучали эту реакцию, очевидно упустили из виду, что перекись водорода активируется пероксидазой не только при гваяковой реакции, но также при выделении иода из йодистого калия. [21]
Тем более поразительна исключительная устойчивость так называемой пероксида-зы. Сок Lathraea, сохранявшийся в течение 10 дней в открытом стакане без прибавления антисептиков и сам по себе уже не вызывающий синего окрашивания гваяковой настойки, давал при прибавлении следов перекиси водорода интенсивное синее окрашивание. [22]
Мазе объясняет неоднократно упоминавшуюся способность растительных объектов выделять иод из подкисленного йодистого калия, предположив наличие азотистой кислоты в каждой живой клетке. Аналогичное объяснение было высказано уже 10 лет тому назад Асо3, в противоположность утверждению Баха и Шода4, что оксидаза, вызывающая посинение гваяковой настойки ( фенслаза) - тождсствена с действующим началом, обусловливающим выделение иода в растениях. [23]
В последнее время Асо4 пытался доказать, что вещество, выделяющее иод и производящее окисление, не тождественно с оксидазами. Он ссылается при этом на сделанное нами наблюдение5, что при хранении растительных соков и при увядании растений понемногу ослабляется как реакция с гваяковой настойкой, так и иодокрахмальная реакция, но что последняя при этом исчезает быстрее, чем первая. Асо делает отсюда вывод, что соответственные окислители имеют различную химическую природу. Поэтому не удивительно, что последняя уже исчезает, вто время, когда первая еще только ослаблена. К этому надо прибавить что в растительных соках при хранении могут возникать вследствие автолиза вещества, не действующие на гваяковую настойку и в то же время легко присоединяющие иод и, таким образом, снижающие чувствительность иодокрахмаль-ных реакций. Аргумент, приведенный Асо, следовательно, не убедителен. [24]
К тому времени, когда Планш проводил свои эксперименты с вытяжками из растений, уже было достаточно точно известно, что имеется связь между посинением гваяковой настойки и присутствием кислорода. [25]
В предшествующем сообщении1 мы высказали на основании некоторых опытов предположение, что способностьсоков различных растений выделять иод из йодистого калия нужно рассматривать как функцию оксидаз, содержащихся в соке. Это предположение оказалось правильным: нам удалось получить из грибов ( Russula foatens, Lacterius vellereus) оксидазу, которая наряду с известными реакциями оксидаз ( окрашивание в синий цвет гваяковой настойки, окисление пирогаллола с образованием пурпу-рогалина и гидрохинона с образованием хингидрона) обладает также свойством выделять иод из подкисленного йодистого калия. [26]
Необходимо, однако, отметить, что тетраметилпарафенилен-диамин ( реакция Вурстера) окрашивается не только перекисью водорода, но и слабосвязанным кислородом ( например, поглощенным хлористым кальцием) и даже просто растворенным кислородом; гваяковая настойка с диастазой окрашивается аммиаком и другими веществами, не имеющими ничего общего с перекисями; сернокислый раствор двуокиси титана дает с таннином такое же окрашивание, как с перекисью водорода; наконец, 1 % - ный раствор уксуснокислого урана так же мутнеет в присутствии тан-вина и белка, как и в присутствии перекиси водорода. [27]
Шпицер, пытавшийся определить количественно окислительную способность животных тканей при помощи вызванного ими каталитического разложения перекиси водорода, пришел к выводу, что способность катализировать перекись водорода нужно приписывать тому же самому ферменту, который вызывает синее окрашивание гваяковой настойки в присутствии перекиси водорода. Однако Лепинуа5 нашел, что интенсивность окрашивания в синий цвет различными объектами не пропорциональна выделению кислорода из перекиси водорода. Наконец, Лев6 окончательно доказал, что способность разлагать каталитически перекись водорода принадлежит определенному ферменту - каталазе. [28]
В первую очередь обращает на себя внимание полный параллелизм между гваяковой и иодокрахмальной реакциями. Растения, окрашивающие немедленно гваяковую настойку, дают без исключения также и положительную иодокрахмальиую реакцию. Чем сильнее одна из этих реакций, тем интенсивнее и другая. Только в случае чрезвычайно медленно действующих оксидаз, окрашивающих гваяковую настойку лишь очень постепенно, нельзя с полной достоверностью установить выделение иода. Как показало изучение многочисленных отпечатков срезов растений на иодокрахмальной и на гваяковой бумажке, в обоих случаях окислительное начало одно и то же и всегда локализовано в периферических слоях клетки. [29]
Правильно предположив, что этот процесс представляет собой окислительную реакцию, Шенбайн допустил, что все процессы так называемого медленного окисления суть процессы каталитические и принялся за детальное исследование этого явления. Из наблюдений над посинением гваяковой настойки он сделал вывод, что кислород только тогда способен к этой реакции, когда он находится в химически возбужденном, активированном состоянии, в которое он переходит под действием некоторых веществ. По его представлениям так должна была действовать размельченная платина при насыщении ее кислородом. [30]