Cтраница 4
Наиболее употребительные относительные методы основаны на измерении подвижности биополимеров в какой-либо системе зонального фракционирования. Для нативных белков используется гель-хроматография. Из-за гетерогенности пор в таких гелях в достаточно широком диапазоне молекулярных масс объем Ve, в котором выходит биополимер, возрастает с уменьшением молекулярной массы М, поскольку возрастает число пор, доступных для биополимера. [46]
Повторное свертывание модифицированных белков дает информацию о процессе свертывания. Исследования повторного свертывания нативных белков были дополнены опытами по повторному свертыванию модифицированных белков. В ранних исследованиях 445 ] было показано, что рибонуклеаза поджелудочной железы, нодинированная по расположенному на поверхности нативной структуры Туг-115, после денатурации теряет способность к повторному свертыванию. Эго показывает, что состояние остатка Туг-115 имеет важное значение для процесса свертывания. Для того чтобы установить, можно ли модифицировать белок ( путем расщепления цепи и делеций в последовательности или путем присоединения объемных групп к боковым цепям) без потери им способности к свертыванию, был проведен ряд систематических исследований нуклеазьг стафилококка и панкреатической рибонуклеазы. [47]
Скорость денатурации уменьшается также, если хранить белковый раствор при пониженной температуре. Для получения препаратов нативных белков необходимо поэтому иметь в лаборатории рефрижераторы, центрифуги с охлаждением и холодные комнаты. При низких температурах уменьшается и вторая опасность - возможность бактериального разложения белка. Белковые растворы представляют собой прекрасную питательную среду для бактерий и неизменно подвергаются, если их хранить при комнатной температуре, заражению бактериями, разрушающими белки. [48]
Пластеины представляют собой вещества, близкие к белкам. Однако они отличаются от нативных белков по своим физико-химическим свойствам и прежде всего полной нерастворимостью в воде. Я - Данилевского о синтезе пластеинов ферментами нашли подтверждение в многочисленных исследованиях В. В. Завьялова, Д. М. Лаврова, Д. И. Кураева, С. С. Салазкина, А. В. Благовещенского и др., показавших, что под влиянием пепсина, трипсина, папаина и других протеолитических ферментов из продуктов пептического или триптического переваривания белка образуются новые, более сложные соединения белкового характера. [49]
Пластеины представляют собой вещества, близкие к белкам. Однако они отличаются от нативных белков по своим физико-химическим свойствам и прежде всего полной нерастворимостью в воде. [50]
Не следует, впрочем, думать, что денатурирование белков в процессе варки способствует лучшему их расщеплению и усвоению. Дело в том, что и нативные белки при резко кислой реакции желудочного сока ( рН 1 - 2) быстро денатурируются и уже в денатурированном виде подвергаются действию пепсина. Денатурация белков во время приготовления пищи имеет, однако, значение в тех патологических случаях, когда желудочный сок имеет не кислую, а нейтральную реакцию. [51]
Он же превращает в активную форму и третий зимоген панкреатического сока - прокарбоксипептидазу в карбоксипептидазу. Главная же функция трипсина - превращение нативных белков в протеозы, пептоны и полипептиды. Так же действует и химотрипсин. Кдрбоксипептидаза гидролизует полипептиды до три - и дипептидов и аминокислот. [52]
Непосредственно в результате облучения возникает дублетный сигнал. При воздействии О2 этот сигнал у нативных белков превращается в синглетный, а у денатурированных остается дублетным. Представляется весьма интересным применить к этим результатам методы анализа, предложенные в главе V. [53]
Интерполяция наблюдаемых величин Ъ0 позволяет получить промежуточные значения доли спирализованных участков. Использование величин bo Для установления степени спирализации нативных белков дало в ряде случаев хорошие результаты, хотя и несколько менее удовлетворительные, чем с синтетическими полипептидами. Для некоторых белков, например, величина bo оказалась более отрицательной, чем - 630, что довольно трудно интерпретировать в свете приведенного выше элементарного рассмотрения. Неопределенности, возникающие при вычислении степени спирализации нативных белков на основе величин bo, объясняются несколькими причинами. Причины эти следующие: 1) отсутствие теоретической основы для уравнения Моффита - Янга; 2) взаимодействие между боковыми цепями, оказывающее влияние на оптическую активность; 3) возможность присутствия ( наряду с а-спиралями) некоторых других типов упорядоченных структур; 4) возможность присутствия в одной и той же белковой молекуле участков, имеющих структуру правой а-спирали, и участков со структурой левой а-спирали. В последнем случае вклады этих участков в величину оптической активности будут взаимно компенсироваться, так что определяемая степень спирализации окажется соответственно заниженной. [54]
В агаровом геле или на ацетат-целлюлозной мембране белковый антиген и специфические антитела диффундируют навстречу друг другу и образуют в месте контакта линии преципитации, которые можно видеть невооруженным глазом или выявить специальным окрашиванием. При анализе двух белковых смесей, например двух разных сывороток или выделенных нативных белков, с помощью этого метода можно не только узнать число индивидуальных белков, присутствующих в нашей системе, но и получить данные об их имму-нохимической идентичности, родственности или различиях. Все эти выводы могут быть сделаны на основании числа и взаимного расположения линий преципитации. [55]