Cтраница 1
Растворимые белки встречаются в клетках в растворенном состоянии или в виде гидратированных гелей. Альбумины растворимы в воде и в разбавленных растворах электролитов ( кислот, оснований, солей); глобулины отличаются от албуминов тем, что они растворимы только в растворах электролитов. К этой категории относятся все белки со специфическими физиологическими свойствами: белки кровяной сыворотки, ферменты, многие белковые гормоны, антитела и токсины. Важной категорией белков являются протеиды, или сопряженные протеины, - соединения белков с небелковым компонентом. [1]
Растворимые белки крайне чувствительны к нагреванию, кислотам, основаниям, органическим растворителям и другим химическим соединениям, производящим их денатурацию. Во избежание денатурации операции выделения и очистки следует проводить при возможно низкой температуре и достаточно быстро, причем следует также избегать попадания бактерий, так как растворы белков являются благоприятной средой для их развития. [2]
Растворимые белки монодисперсны, так как имеют строго определенный аминокислотный состав и чередование отдельных остатков аминокислот. [3]
Растворимые белки образуют вязкие, коллоидные, клейкие растворы, превращающиеся после удаления растворителя в твердую аморфную пленку, которая сохраняет высокую адгезию к целлюлозо-содержащим материалам. На этом свойстве основано использование растворов белков в качестве клеев. Клей обеспечивает высокую прочность соединения древесины. [4]
Хорошо растворимые белки, такие, как яичный альбумин или гемоглобин, легко образуют поверхностные пленки на воде или на разбавленных солевых растворах. Желатина совершенно не образует пленок на свободной от солей воде, но может образовывать пленки на поверхности раствора сульфата аммония. [5]
Некоторые растворимые белки могут находиться в растворе в одном из двух состояний - в фазе золя или в фазе геля. В фазе золя молекулы белка образуют истинный раствор, тогда как в фазе геля они агрегируют и не могут далее уже оставаться в растворе. Равновесие между золем и гелем определяется химическими и физическими свойствами раствора, которые влияют на взаимодействие между мономерами белка. [6]
Колориметрия растворимых белков по методу Лоури проводится следующим образом. В и оставляют стоять при комнатной температуре в течение 10 мин. В качестве стандарта используют растворы сывороточного альбумина быка или человека в концентрации 0 02 - 0 5 мг / мл. Реактив Г представляет собой разведенный до конечной концентрации кислоты реактив Фолина-Чокальто. [7]
Экстракция растворимых белков из тканей может происходить только после разрушения клеточных оболочек, так как последние непроницаемы для больших белковых молекул. Разрушения клеток можно достичь механическим путем, растирая их с песком или с кизельгуром; однако при этом наблюдается некоторая потеря белка за счет денатурации, вызываемой адсорбцией белка на силикате. По этой причине лучше разрушать клетки такими приборами, как мясорубка Латапи или гомогенизаторы. Структура клетки разрушается также при действии органических растворителей, например спирта, ацетона или глицерина. Если концентрация глицерина не превышает 85 %, то в глицериновый экстракт переходит значительная часть растворимого белка. [8]
Большое число растворимых белков гладко подвергаются денатурации, теряя при этом свои специфические свойства. Растворимые белки гидролизуются протеолитическими ферментами. [9]
В молекулах растворимых белков обычно имеется приблизительно одинаковое количество свободных карбоксильных и аминогрупп, и они могут одновременно диссоциировать как основания и как кислоты. [10]
Виеме [182] выделил растворимые белки, полученные пункцией печени человека методом электрофореза агарового студня, не прибегая к гомогенизации. Ахарья и др. [183], Раманатан [184] и Попадюк [185] анализировали белки сыворотки методом электрофореза агарового студня на покровных стеклах. [11]
Выделение и очистка растворимых белков производится путем экстрагирования их из клеток соответствующими растворителями с последующим осаждением, которое достигается либо изменением концентрации солей или водородных ионов, либо путем добавления органических соединений. [12]
Чтобы избежать этого превращения растворимых белков в нерастворимые, необходимо, во-первых, обрабатывать мышцы сразу же после умерщвления животного и, во-вторых, вести экстракцию при низких температурах. [13]
В сыворотке крови содержатся и другие растворимые белки - глобулины. Глобулины и образуют вторую половину белков плазмы крови; 15 % приходится на а-глобулин, 19 % на р - и 11 % на у-глобулин. Белки этой фракции играют важную роль в развитии иммунитета; антитела представляют собой у-глобулины. [14]
Для того чтобы сделать возможным экстрагирование более растворимых белков, многие животные и растительные ткани соответствующим образом измельчают. Мышцы животных бывает достаточно размельчить в обычной мясорубке. При выделении растворимых ферментов слишком тонкое измельчение часто оказывается нежелательным, так как оно нередко затрудняет отделение индивидуального вещества и усиливает деструктивное действие ферментов. [15]