Овальбумин
Cтраница 4
В гликопротеинах преобладает белковый фрагмент, в связи с чем они имеют ряд структурных особенностей, отличающих их от полимеров первой группы. Углеводные фрагменты этих соединений наиболее часто представлены поли - и олигосахаридами нерегулярного строения. Степень полимеризации моносахаридов в цепях невелика. В гликопротеинах подчелюстной железы быка и овцы углеводная простетическая группа представлена дисахаридом, в овальбумине - октасахаридом, в орозомукоиде найден декасахарид, в фетуине содержится 17 углеводных остатков. Типичными моносахаридными звеньями в этих веществах являются аминосахара, галактоза, фукоза и нейраминоеая кислота, присоединенная к концам углеводных фрагментов. [46]
Многие эукариотические гены ( может быть, даже большинство их) обладают весьма загадочной структурной особенностью, которая состоит в том, что в их нуклеотидную последовательность вставлен участок ДНК, не кодирующий аминокислотную последовательность полипептидного продукта. Такие нетранслируемые участки ДНК в генах называют вставочными последовательностями, или нитронами, тогда как участки гена, кодирующие аминокислотную последовательность полипептида, называют экзонами. Хорошо известным примером может служить ген, кодирующий единственную полипептидную цепь яичного белка - аваль бумина. На рис. 27 - 29 видно, что в этом гене присутствуют шесть интронов, которые разделяют ген овальбумина на семь экзонов. Видно также, что интроны в этом гене гораздо длиннее экзонов-суммарная длина всех интронов составляет 85 % общей длины ДНК гена. За немногими исключениями, все изученные к настоящему времени эукариотические гены содержат интроны, которые различаются по числу, по месту расположения, а также по тому, какую часть общей длины гена они занимают. Например, ген сывороточного альбумина содержит 6 интронов, ген белка кональбумина куриных яиц - 17 интронов, а ген коллагена-свыше 50 интронов. Исключение составляют гены гистонов, которые, по-видимому, не содержат интронов. [48]
Несмотря на большое количество примеров, когда секреторные и внутримембранные белки синтезируются с отщепляемой сигнальной N-концевой последовательностью, это, по-видимому, не есть общее правило. Некоторые белки, как оказалось, тоже синтезируются на мембраносвязанных рибосомах, но без отщепления N-концевой или какой-либо иной сигнальной последовательности. К ним относится такой типичный секреторный белок, как овальбумин, а также мембранные белки цитохром Р-450, эпоксидгидратаза, ретинальный опсин, гликопротеид РЕа вируса Синдбис. В этих случаях растущая полипептидная цепь тоже, по-видимому, имеет сигнальную последовательность, индуцирующую присоединение транслирующей рибосомы к мембране эндоплазматического ретику-лума и ко-трансляционный транспорт белка в мембрану, но без сопутствующего процессинга. Для цитохрома Р-450 показано, что его N-концевая последовательность гидрофобна и напоминает сигнальную, но она сохраняется у зрелого белка. Однако N-концевые последовательности овальбумина и опсина не похожи на обычную сигнальную последовательность. Возможно, что либо сигнальную роль здесь выполняют специальные внутренние гидрофобные участки растущего полипептида, либо не столь гидрофобная N-концевая последовательность тоже в каких-то случаях может служить сигналом для присоединения к мембране. Как и в других случаях, взаимодействие с мембраной возможно лишь в течение трансляции; но не после нее; очевидно, сворачивание завершенной цепи как-то блокирует ( экранирует) сигнальную функцию соответствующего участка. [49]
Сюда относятся исследования Анфин-сена и сотрудников [597, 598, 664], посвященные образованию яичного белка в яйцеводе курицы. Синтезированный в организме из С14О2 яичный альбумин расщепляли при помощи субтилизина на пластинчатый альбумин ( плакальбумин) и пептиды. Было найдено, что метка аспарагиновой кислоты в пептидах выше метки аспарагиновой кислоты плакальбумина. В аналогичных опытах с мечеными аминокислотами было отмечено неравномерное распределение метки в остатках глутаминовой кислоты, глицина, аланина и серина. Кроме того, в аналогичных опытах с другими биологическими системами были получены противоположные результаты. Стайнберг указал на то, что в опытах с биосинтезом овальбумина неравномерная метка аминокислот наблюдается лишь при сравнительно кратковременных опытах; если инкубирование продолжается в течение 10 час. [50]
Белок, сохраняющий свои характерные специфические свойства, называется нативным белком: гемоглобин в том виде, в каком он находится в эритроцитах или в тщательно приготовленном растворе гемоглобина, в котором он все еще продолжает сохранять свое свойство обратимо соединяться с кислородом, называется нативным гемоглобином. Многие белки очень легко теряют присущие им специфические свойства. Тогда говорят, что они денатурированы. Гемоглобин можно денатурировать просто нагреванием его раствора до 65 С. В результате такого нагревания он коагулирует, образуя нерастворимый коагулят кирпично-красно-го цвета. Большинство других белков также денатурируется при нагревании приблизительно до такой же температуры. При нагревании его раствора примерно до 65 С и выдерживании в течение некоторого времени при этой температуре овальбумин денатурируется, давая нерастворимый белый коагулят. Это явление наблюдается при варке яиц. [51]
Приблизительно третья его часть элюировалась тем же самым буфером, но почти 20 мг белка оставались связанными, несмотря на интенсивную промывку, и могли быть отмыты, только когда возрастала ионная сила элюирующего раствора. Часть оставшегося на колонке белка отмывается 0 01 М трис - НС1 - буфером, однако большая часть белка отмывается 0 01 М трис - НС1 - буфером, содержащим 0 1 моль / л хлорида натрия, и очень небольшое количество белка - 0 1 М трис - НС1 - буфером, содержащим 1 0 моль / л хлорида натрия. Эти результаты указывают на то, что часть белка освобождается на каждом уровне ионной силы раствора, в то время как остальная часть остается необратимо связанной в данных условиях. Фракционирование одного и того же белка Хофсти объясняет негомогенностью связывающих центров адсорбента. Элюирование этого небольшого количества белка при помощи градиента ионной силы ( хлорид натрия) происходит растворами с концентрацией соли, соответствующей элюенту, снимающему с колонки последние остаточные количества прочно адсорбированного белка, в случае, когда на колонку наносилось большое количество овальбумина. Эти результаты означают, что некоторые сильносвязывающие центры занимаются белком в первую очередь и что некоторые другие участки с пониженной аффинностью занимаются при нанесении на колонку большего количества белка. Такие же результаты были получены и для других белков и красителя понсо S. Из этого следует, что при нанесении на колонку небольших количеств белков они связываются со специфическими сорбентами более гомогенно, чем при нанесении больших. Это может означать, что уменьшение количества наносимого белка способствует использованию преимущественно одного типа связывающих центров адсорбента. [52]
Страницы: 1 2 3 4