Cтраница 1
Оксиапатит сорбирует довольно широкий спектр биополимеров, куда входят кислые и щелочные белки, нативные двунитевые ДНК, денатурированные однонитевые ДНК и РНК. Незаряженные макромолекулы, например полисахариды, не сорбируются, так же как аминокислоты, короткие пептиды и нуклеотиды. Нуклеиновые кислоты сорбируются прочнее, чем белки, двунитевые ДНК - прочнее, чем однонитевые. [1]
Оксиапатит, применявшийся для тонкослойной хроматографии Гофманом [3, 4], в настоящее время продается в виде суспензии в фосфатном буферном растворе под названием гипа-тит ( Clarkson Chemical Co. [2]
Колонки оксиапатита обычно предварительно промывают 5 - 10 объемами слабого ( 0 05 М) нейтрального фосфатного буфера. Если стабильность белка требует определенной ионной силы, ее обеспечивают добавлением в буфер для промывки и элюент соли. Особо прочно сорбированные белки нередко снимают пирофосфатом. [3]
Строение синтетических оксиапатитов и Н - связь, дискуссия. [4]
Примеры использования оксиапатита для разделения одно - и двунитевых молекул нуклеиновых кислот и соответствующие практические рекомендации будут приведены в следующих разделах. Общее рассмотрение сорбции НК на оксиапатите закончим указанием на то, что на 1 мл упакованного оксиапатита можно сорбировать 0 2 - 0 5 мг ДНК, однако для целей фракционирования не следует превышать первой из этих цифр. Присутствие ЭДТА и цитрата препятствует сорбции, по-видимому, за счет блокирования кальция на поверхности сорбента. Следует упомянуть о том, что в аналитических опытах при избытке сорбента не только элюцию, но и исходную сорбцию НК на оксиапатите следует производить достаточно медленно, например в течение 30 мин, с тем чтобы дать возможность молекулам ДНК или РНК отыскать наиболее благоприятное для сорбции расположение на поверхности сорбента. [5]
Хроматографию на оксиапатите чаще используют не для фракционирования, а для очистки одного из компонентов смеси, заведомо отличающегося по прочности сорбции от остальных. [6]
Очистке на оксиапатите предшествовали освобождение фермента из мембран с помощью дезоксихолата натрия, хроматография на DE-52 и гель-фильтрация на сефадексе G-200. [7]
Выше этой температуры оксиапатит нестабилен и распадается при нагревании на фазы три - и тетра-кальцийфосфата. Каждая из этих фаз также имеет переменный состав, кроме того, трикальцийфосфат подвергается температурному полиморфному превращению ( энантиотропного характера) при 1180 С. Ниже этой температуры он переходит в - модификацию. Как тетрафосфат кальция, так и высокотемпературная - ( - форма трикальцийфосфата растворимы в 2 % - ном растворе лимонной кислоты. При их быстром охлаждении ( закалке) удается сохранить высокотемпературную форму в метастабильном состоянии и в обычных условиях. Поскольку скорость превращения одной формы в другую при обыкновенной температуре окружающей среды ничтожна, растворимые формы стабилизируются, и прокаливанием оксиапатита при температуре до 1450 С можно получить фосфаты, содержащие фосфор в усвояемой растениями форме. [8]
Из общих свойств оксиапатита отметим еще то, что OHi легко растворим в 25 % - ном водном растворе ТХУ. Рассмотрим теперь несколько примеров фракционирования и очистки белков и НК на колонках оксиапатита. [9]
Связь гистонов с оксиапатитом имеет, очевидно, катионный характер, что позволяет фракционировать их ( и одновременно диссоциировать от ДНК) при ступенчато увеличивающейся концентрации NaCl. В 0 1 М фосфатном буфере ДНК остается связанной с. [10]
Фирма Bio-Rad производит порошок оксиапатита для ТСХ под названием био-гель НТР. [11]
Хофман [11, 138, 139, 315] ввел в употребление оксиапатит в качестве адсорбента для разделения липидов и белков. [12]
Приведенные примеры иллюстрируют возможность использования оксиапатита для очистки более или менее высокополимерной ДНК. На колонках с этим сорбентом удается фракционировать и короткие фрагменты ДНК по их длине. [13]
Аналогичным образом удается очистить на оксиапатите суммарную нативную ДНК от РНК. [14]
После охлаждения раствора добавляли 15 г оксиапатита и тщательно перемешивали до получения однородной суспензии. Поскольку введение алебастра в качестве связующего улучшает разделение, 15 г оксиапатита смешивали с 1 2 г алебастра и диспергировали в 60 мл воды, энергично встряхивая смесь в закрытой склянке. [15]