Олигонуклеотида
Cтраница 1
Олигонуклеотиды, комплементарные последней, спариваются с ней. В реакционную смесь добавляют все четыре дезоксирибонуклеотида ( причем один из них меченый) и фермент, катализирующий синтез фрагментов ДНК с использованием цепей ДНК-мишени в качестве матрицы, а гибридизировав-шихся фрагментов - в качестве затравки. [1]
Олигонуклеотиды или нуклеиновые кислоты, способные взаимодействовать с определенными, имеющими биологический смысл участками нуклеиновой кислоты, называют анти-смысловыми. Развитие таких подходов стало в последнее время одной из наиболее бурно развивающихся областей биотехнологии. [3]
Олигонуклеотиды, составляющие вышеуказанные реагенты, образуют комплементарные комплексы с нуклеотйдами 261 - 274 ( А и В) или 261 - 270 ( С) мишени. Как видно из рис. 95, реагент; А с реакционноспособной группой, присоединенной к аденозину, образующему Уотсон-Криковскую пару с основанием 261, алкилйрует преимущественно G-258; реагент с группой, присоединенной к pdC, образующий пару с G-275, модифицирует главным образом этот же гуанин; реагент С с группой на pdC, взаимодействующей с G-270, большей часть алкилйрует G-271 и G-272. Во всех этих трех случаях реакция протекает избирательно в той области, где находится реакционноспособная группа. [4]
Олигонуклеотиды и РНК остаются в растворе, тогда как ДНК образует нити, которые можно собрать наматыванием на стеклянную палочку. [5]
Олигонуклеотиды, содержащие два или более остатка U, разделяются плохо, так как их подвижность на DEAE-бумаге мала. [6]
Олигонуклеотиды с молекулярным весом менее 10 ООО фракционируют электрофорезом в 15 % - ном полиакриламидном геле ( Gould et aL, 1969), где олигонуклеотиды делятся главным образом в соответствии с размерами молекул: чем меньше молекула, тем быстрее она движется через гель. Таким образом, этот метод подобен хроматографическому разделению по длине цепи, однако для длинноцепочечных олигомеров электрофорез в геле позволяет получить лучшее разрешение, чем хроматография. Это показано на рис. 11.7, где сравниваются положения олигонуклеотидов из T - j - PHK - азного гидролизата РНК TMV при электрофорезе и колоночной хроматографии. [7]
Олигонуклеотиды специфически адсорбируются в тех зонах слоев ПЭИ-целлюлозы, которые содержат комплементарные им по основаниям полинуклеотиды. Образовавшиеся комплексы обладают заметной устойчивостью к нагреванию, которая обусловлена их фиксацией на ПЭИ-целлюлозе. Поскольку стабильность комплексов зависит от химического состава, длины цепи полинуклеотидов и температуры, с помощью хроматографии при различных температурах в присутствии комплементарного полинуклеотида можно не только разделять гомологичные олигонуклеотиды, по и отделять их от других олигону-клеотидов. [8]
Олигонуклеотиды, образовавшиеся при действии на РНК панкреатической РНК-азы, гидролизуют 30 мин при 37 рибонукле-а. [9]
Олигонуклеотиды, полученные при гидролизе РНК рибонуклеазой Ti. Характер разделения некоторых олигонуклеотидов, образующихся при гидролизе РНК рибонуклеазой TI, показан на фиг. Цифры на этой фигуре соответствуют номерам пятен па двумерных электрофореграммах ( фиг. [10]
Олигонуклеотиды, содержащие два и более остатков У, на ДЭАЭ-бумаге движутся медленно даже в 7 % - пой муравьиной кислоте и разделяются довольно плохо. [11]
Олигонуклеотиды, синтезированные химическими методами, находят широкое применение в молекулярной биотехнологии. Их используют в качестве зондов при ДНК-гибридизации, линкеров, соединяющих разные молекулы ДНК в экспериментах по клонированию, праймеров при секвенировании ДНК или осуществлении сайт-специфического мутагенеза клонированных генов-мишеней. [12]
Крупные олигонуклеотиды, полученные обработкой тРНК РНКа-зой S1 ( разрыв по антикодону) или неполным гидролизом РНКа-зой Т1, делили одномерной ТСХ. [13]
Олигонуклеотиды несут большой отрицательный заряд, поэтому они с успехом могут быть разделены на слабых крупнопористых анио-нообменниках. Для этой цели используют колонки, заполненные ДЭАЭ-сефадексом, ДЭАЭ-целлюлозой, Эктеола-целлюлозой и др. Нук-леотиды элюируются с колонки в градиенте концентрации NaCl в порядке увеличения их молекулярной массы. Для подавления неспецифической сорбции нуклеотидов на полисахаридных матрицах хроматографию проводят в присутствии 7 М мочевины. [14]
Страницы: 1 2 3 4 5