Cтраница 4
Использование аналитического метода как средства для дифференциации белков и объяснения их свойств впервые было предложено, повидимому, Риттхаузеном [68] в 1872 г. Такой подход к проблеме не потерял своего значения и сейчас, что стало очевидным после высказанного Викери в 1946 г, следующего утверждения [69]: В последние годы вновь возникло убеждение в том, что не только химические, но также и физические свойства, или по крайней мере, многие из них, можно рационально объяснить исходя из аминокислотного состава, если последний достаточно хорошо известен и может быть правильно интерпретирован. Однако адэкватная интерпретация до настоящего времени невозможна и это отмечается, например, в высказывании Бейли [70]: Одна из наиболее обескураживающих особенностей определения аминокислотного состава белков заключается в том, что полученные результаты не позволяют делать каких-либо существенных выводов. [46]
Для определения аминокислотного состава белка применяют различные физико-химические методы, например распределительную хроматографию и ионообменную хроматографию. Распределительная хроматография на бумаге имеет преобладающее значение. Длительное и сложное определение аминокислотного состава гидролизатов сейчас автоматизировано: по графику на ленте автомата находят абсолютное содержание аминокислот. [47]
Аминокислотный состав белка устанавливают методом его гидролиза кислотами, щелочами или ферментами. Широко применяется кислотный гидролиз ( 80 % - ная серная или 20 % - нал соляная кислота), протекающий наиболее полно. Для определения аминокислотного состава белка применяют различные физико-химические методы, например распределительную хроматографию и ионообменную хроматографию. Распределительная хроматография на бумаге имеет преобладающее значение. Длительное и сложное определение аминокислотного состава гидролизатов сейчас автоматизировано: по графику на ленте автомата находят абсолютное содержание аминокислот. [48]
Это обусловлено, по всей вероятности, тем, что в белковой молекуле некоторые реактивные группы скрыты внутри глобулы и вследствие этого недоступны действию окрашивающего реагента ( см. гл. Поэтому для определения аминокислотного состава белка необходимо подвергнуть его полному гидролизу. Разделение смеси аминокислот представляет собой трудную задачу, так как аминокислоты являются амфолитами, растворимыми в воде и нерастворимыми в таких органических растворах, как спирт. Только иминокислоты пролин и окси-пролин растворимы в этиловом спирте. Ввиду того что аминокислоты обладают сходными физико-химическими свойствами, их нельзя разделить фракционированием спиртом или нейтральными солями. [49]
Применение хроматографи-ческого анализа позволяет значительно облегчить и упростить определение аминокислотного состава белков. [50]