Остатки - тирозин
Cтраница 4
Преимуществом спектров комбинационного рассеяния является то, что они мо гут быть сняты как для образцов в твердом состоянии, так и в самых разнообразных растворителях, в том числе в обычной и тяжелой воде. Этот метод дает информацию не только о вторичной структуре, но и об элементвх третичной структуры: о конфигурации дисульфид-иых связей, участии боковых цепей остатков тирозина в водородных связях, об экспонированном ( доступном для растворителя) или спрятанном в белковой глобуле положении остатков триптофана. Микроокружение аромвтических остатков в белках исследуется методом флуоресценции. Для этих целей используются также анв-лиз спектров КД в области 250 - 300 нм и дифференциальные УФ-спектры, получаемые при изменении рН водной среды, температуры или состава растворителей. По спектрам КД следят за кон-формационными превращениями белкоа и пептидов а процессе их функционирования, а также проверяют, сохранилась ли натианая конформация при изменении условий окружающей среды или при химической модификации природного соединения. [46]
 |
Иммуноэлектрофореграмма белков сыворотки крови человека ( по Генри. [47] |
При электрофорезе в крахмальном геле фракция альбуминов у некоторых людей иногда делится на две ( альбумин А и альбумин В), т.е. у таких людей имеется два независимых генетических локуса, контролирующих синтез альбуминов. Добавочная фракция ( альбумин В) отличается от обычного сывороточного альбумина тем, что молекулы этого белка содержат два остатка дикарбоновых аминокислот или более, замещающих в полипептидной цепи обычного альбумина остатки тирозина или цистеина. Наследование полиморфизма альбуминов происходит по аутосомному кодоминантному типу и наблюдается в нескольких поколениях. [48]
Эта формула представляет собой, по-видимому, единственный результат общего анализа всех накопленных данных. При ее построении исходили из трех следующих положений: а) пептидная цепь неразветвлена и все аминокислоты соединены классической пептидной связью, б) остатки основных аминокислот s пептидах триптического гидролизата должны занимать С-конце-вое положение, в) остатки тирозина и фенилаланина в пептидах химотриптического гидролизата расположены на С-концах. [49]
Одной из широко распространенных химических постсинтетических модификаций является фосфорилирование остатков серина и треонина, например, в молекуле гистоновых и негистоновых белков, а также казеина молока. Фосфорилирование-дефосфорилирование ОН-группы серина абсолютно необходимо для множества ферментов, например для активности гликоген-фосфорилазы и гликоген-синтазы. Фосфорилирование некоторых остатков тирозина в молекуле белка в настоящее время рассматривается как один из возможных и специфических этапов формирования онкобелков при малигнизации нормальных клеток. Этим обеспечивается не только защита от внешних денатурирующих агентов, но и образование нативной конформации и проявление биологической активности. [50]
Аналитические данные и результаты титрования рибонуклеа-зы согласуются между собой очень хорошо. Кривая титрования в интервале 2рН11 5 может быть рассчитана как результат наложения шести кривых, построенных по уравнению ( V. Из шести остатков тирозина три титруются нормально и обратимо с pkmi - 9 95, а три других ионизуются лишь около рН 12, причем необратимо, как в яичном альбумине. Таким образом, титрование этих последних возможно лишь в той области рН, в которой белок утрачивает свою ферментативную активность. При обратном титровании или в присутствии избытка мочевины все 6 остатков тирозина титруются одновременно. [51]
Помимо вышеуказанных реагентов, следует упомянуть диизо-пропилфторфосфат 56 ], также модифицирующий тирозин. Разрушение тирозина, а также триптофана и гистидина идет под действием УФ-излучения. Для распознавания состояния остатков тирозина и триптофана используются также небольшие спектральные смещения ( см. разд. [52]
Фосфопротенны содержат остатки О-фосфосерина, реже - О-фосфотирозина, а в Г1икопротеинах ряд остатков сернна, треонина или аспарагина - ковалентно присоединенные углеводные цепи. В гистонах е-вминогруппы некоторых остатков лизина бывают моно -, дн - или три метилированы, иногда - ацетилированы. В других белках встречаются также иодированные остатки тирозина, метилированные остатки аргинина и гистидина. Особенно часто необычные аминокислоты входят в состав пептидных антибиотиков. [53]
Наличие двух полуцистиновых остатков в молекуле других типов стафилококковых энтеротоксинов свидетельствует о существовании у них одной дисульфиднои связи, сходства в строении. Наличие ци-стиновой петли является характерной особенностью для всех типов стафилококковых энтеротоксинов. В поддержании устойчивой структуры молекулы токсина играют остатки тирозина, которые формируют по-видимому внутреннее ядро структуры. Блокирование всех остатков тирозина гуанидинхлоридом приводит к полной инактивации токсина. [54]
Несмотря на то, что Херриотт раньше уже показал, что интенсивное ацетилирование или иодирование фенолышх групп пепсина приводит к снижению его активности [ 49а, 63 ], Френкель-Конрат нашел, что фенольные группы не имеют существенного значения для проявления активности трипсина. Этот вывод заставляет предполагать, что значительная доля остатков тирозина была недоступной для тирозиназы. Однако Эдман [62] указал ( и Сайзер впоследствии присоединился к мнению Эдмана) на то, что интерпретация влияния тирозиназы на активность протеолитических ферментов затемняется тем фактом, что в условиях опыта происходят мгновенная денатурация пепсина и автолиз трипсина. Повторив манометрические измерения Сайзера, Эдмаи [62] пришел к выводу о том, что поглощение кислорода и прочие наблюдавшиеся эффекты объясняются скорее реакцией небелковых азотистых примесей, всегда сопутствующих протеолитическим ферментам, чем непосредственной реакцией между тирозиназой и тирозином в самих белках. Сайзер [ 61, 64, 65а ] повторил как свою оригинальную работу, так и опыты Эдмана и продолжал утверждать, что данные манометрических измерений и спектроскопических исследований, а также результаты анализов на содержание тирозина не могут быть объяснены окислением примесей, обычно присутствующих в белке, и только частично обусловлены окислением тех способных к диализу продуктов автолиза, которые выделяются в ходе реакции. Тромбин и фибриноген при этом значительно инакти-вируются, что следует из увеличения времени свертывания крови. Все три белка обнаруживают повышенное поглощение в ультрафиолетовой области. Количество фибрина, образовавшегося из фибриногена, предварительно подвергнутого интенсивному окислению тирозиназой, уменьшалось. При исследовании с помощью электронного микроскопа была установлена его аморфность. Обработанный тирозиназой фибрин переходил из фибриллярной формы в аморфную. [55]
Химотрипсин ( КФ 3.4.21.1) секретируется вфор-ме профермента - химотрипсиногена поджелудочной железой позвоночных животных; активация профермента происходит в двенадцатиперстной кишке под действием трипсина. Физиологическая функция химотрипсина - гидролиз белков и полипептидов. Химотрипсин атакует преимущественно пептидные связи, образованные карбоксильными группами остатков тирозина, триптофана, фенила-ланина и метионина. Он эффективно гидролизует также сложные эфиры соответствующих аминокислот. Молекулярная масса химотрипсина равна 25 000, молекула его содержит 241 аминокислотный остаток. Химотрипсин образован тремя полипептидными цепями, которые связаны дисульфидными мостиками. [56]
Страницы: 1 2 3 4