Очистка - белок
Cтраница 2
 |
Очистка гемоглобина ( /.| Разделение смеси ДНК ( / и фенола ( 2 на сефадексе. [16] |
Как иллюстрация этой возможности на рис. 28 показана хроматограмма очистки природного белка - гемоглобина - от повареной соли, использующейся для выделения гемоглобина из сыворотки крови. Как видно из хромато-граммы, при пропускании смеси гемоглобина и NaCl через сефадекс G-25 можно получить образцы белка, не содержащие соли. [17]
Особой задачей, общей для самых различных методов и стадий очистки белков, является концентрирование белковых растворов. В тех случаях, когда имеется щадящий метод осаждения белка, применяемый на данной стадии очистки, концентрирование сводится к осаждению с последующим растворением осадка в меньшем объеме. Если же осаждение почему-либо нежелательно, приходится прибегать к различным по сложности методам. Небольшие объемы белковых растворов удобно концентрировать, помещая в целлофановую гильзу, обдуваемую воздухом с помощью вентилятора. Хорошие результаты достигаются также при диализе растворов белка против концентрированных растворов или суспензий таких полимеров, как поливинилпирролидон, полиэтиленгликоль и некоторые смолы, применяемые для хроматографии. Концентрирование выпариванием под вакуумом допустимо лишь в условиях, исключающих вспенивание. Если в распоряжении исследователя имеется достаточно производительная установка для лиофилизации, то можно высушить препарат из замороженного состояния под вакуумом до любых значений остаточной влажности. [18]
Согласно Шальтье [48], гидрофобная хроматография была первым из используемых методов очистки белков и других био - цогических молекул. [19]
Маркерный пептид ( Marker peptid) Участок гибридной белковой молекулы, облегчающий идентификацию или очистку белка. [20]
Ввиду большой термолабильности большинства ферментов необходимо с первых же стадий работы по выделению и очистке белка - фермента все операции проводить при охлаждении. [21]
ТСГФ удобно использовать в качестве экономного пробного метода для выбора типа геля и скорости элюции при подготовке препаративной очистки белка гель-фильтрацией на колонке. Малое количество необходимого препарата и возможность одновременного обследования нескольких препаратов делает метод ТСГФ привлекательным и для клиники, где он может дополнить, а иногда и заменить электрофорез и электрофокусирование. [22]
Впрочем, в вопросе о продолжительности элюции следует проявлять известную осторожность, особенно когда речь идет об очистке белков или других макромолекул. [23]
В книге подробно рассматриваются автоматический метод анализа пептидов и белков с помощью ионообменной хроматографии, газожидкостная хроматография аминокислот и пептидов, очистка белков с помощью гель-фильтрации и электрофореза, изучение функциональных групп в белках с привлечением химических методов. Отдельная глава посвящена изучению четвертичной структуры белков. [24]
Следующее ниже описание характера влияния каждой из нескольких важных переменных на растворимость некоторых классов белков дано в качестве руководства для использования при разделении и очистке белков. [25]
Биохимия этих допаминовых рецепторов изучена очень плохо. Очистка рецепторных белков оказалась сложной из-за отсутствия богатого источника рецепторов, например число бути-рофенонсвязывающих центров ( D2) в полосатом теле мозга быка составляет только 450 фмоль / мг белка или 50 пмоль / г ткани. [26]
Несмотря на это, трудности выделения чистых белков были в значительной мере преодолены, и в настоящее время огромное количество белков, в том числе и ферментов, выделено в чистом кристаллическом состоянии. Среди методов очистки белков большую роль играет дробное осаждение сульфатом аммония, электрофорез и другие методы. [27]
Несмотря на это, трудности выделения чистых белков были в значительной мере преодолены, и в настоящее время огромное количество белков, в том числе и ферментов, выделено в чистом кристаллическом состоянии. Среди методов очистки белков большую роль играет дробное осаждение сульфатом аммония, электрофорез и др. методы. [28]
 |
Диаграмма фракционирования белков плазмы крови человека этанолом ( по методу Кона. [29] |
При выделении и очистке белков используют четыре основных типа хроматографии: адсорбционную, распределительную, ионообменную и аффинную ( хроматография по сродству) - в соответствии с разными физическими и химическими механизмами, лежащими в основе каждого из них. Хроматография широко применяется не только для выделения белков, но и для разделения множества других органических и неорганических веществ, входящих в состав живых организмов. [30]
Страницы: 1 2 3 4