Очистка - белок
Cтраница 3
 |
Молекулярная масса некоторых белков. [31] |
Это обстоятельство ограничивает выбор средств исследования строения белка. Весьма ответственной операцией является очистка белка с целью удаления воды и примесей минеральных солей. Эта операция вызывала часто нарушение первоначального строения белка. [32]
Это ограничивает выбор средств исследования строения белка. Весьма ответственной операцией является очистка белка с целью удаления воды и примесей минеральных солей. Эта операция часто вызывала нарушение первоначального строения белка. [33]
В особых случаях при очистке белков могут быть полезны такие энергичные осадители, как метафосфорная кислота, соли некоторых тяжелых металлов, трихлоруксусная кислота и ряд других. Очевидно, что использование осадителей такого типа, известных как денатурирующие агенты, возможно лишь при очистке белков, особо устойчивых к денатурации, или требует отработки весьма строгих условий, позволяющих защитить белки от денатурации. В то же время возможности использования относительно малых концентраций таких реагентов и большая полнота осаждения привлекают к ним внимание при разработке промышленных схем получения некоторых белков. [34]
При этом водорастворимый белок будет экспонирован в водное окружение, и при необходимости его можно будет отщепить. Это позволяет значительно удешевить процедуру очистки белков, синтезируемых растениями. [36]
Ниже излагаются основное общие способы очистки белков, а также примеры того, как разные способы сочетаются в процессе очистки отдельных белков. В заключение рассматриваются критерии полноты очистки белков. [37]
Элюцию вещества с лиганда осуществляют также путем восстановления S-S - связи, пропуская в качестве элюента через колонку раствор цистеипа ( 5 - 20 мМ в буфере с рН 8), меркаптоэтанола или ДТТ. Примеры режимов элюции приведены ниже; отметим только, что при очистке белка концентрация восстанавливающего агента в элюенте должна быть минимально необходимой, чтобы избежать восстановления и разрыва внутримолекулярных S-S - связей белка. [38]
Как указывалось выше, зонный электрофорез белковых смесей с использованием емкого носителя, обычно крахмальных блоков, обладает исключительно высокой разрешающей способностью и позволяет почти количественно выделить нужный белок. Эта особенность метода зонного электрофореза делает его исключительно эффективным при решении проблемы очистки белков. [39]
 |
График для определения полной эффективной емкости обменника для данного биополимера ( текст. [40] |
Волокнистые целлюлозы с их лучшими гидродинамическими характеристиками более удобны на этих ранних этапах, когда экстракты вязки, объем их достаточно велик, а качество разделения фракций может быть еще не очень высоким. Микрогранулированные целлюлозы, дающие примерно вдвое лучшие разрешения, чем волокнистые, следует предпочесть на более поздних этапах очистки белка. [41]
После выделения и операций предварительной очистки ферменты фракционируют и получают высокоочищенные препараты. Наиболее распространенными способами более высокой очистки являются: фракционирование действием органических растворителей, нейтральных солей, при помощи адсорбционных методов, ионообменной хромотографии, очистка ферметных белков кристаллизацией. Менее употребительны - фракционирование с помощью ионов тяжелых металлов, гельфильтрации, электрофореза, а также некоторые другие способы. [42]
Анализ показывает, что в состав белков входят: углерод, ьодород, кислород азот и сера. В состав некоторых белков, кроме того, входит фосфор. Трудность очистки белков приводит к тому, что часто при анализе одного и того же белкового вещества разные исследователи получают различные цифры. [43]
Их генетика хорошо изучена, а кроме того, их можно выращивать в больших ферментерах. Чтобы упростить очистку белков, были сконструированы векторы, обеспечивающие их секрецию. Однако многие рекомби-нантньш белки в этой системе не подвергались посттрансляционной модификации, к тому же их выход зачастую был недостаточно высок. Поэтому были предприняты попытки разработать другие дрожжевые системы синтеза рекомби-нантных белков. [45]
Страницы: 1 2 3 4