Очистка - белок
Cтраница 4
 |
Оптическая схема прибора для электрофореза фирмы Perkin-Elmer. модель 238. [46] |
Добавление любого компонента, конкурирующего с гидрофильной макромолекулярной частицей за воду, обычно инициирует осаждение. Чаще всего в роли осадителей выступают органические растворители, такие, как этанол или ацетон, а также нейтральные соли. Изоэлектрическое осаждение является одним из стандартных приемов очистки белков. [47]
Поэтому если золь содержит большое количество электролита и обладает высокой электропроводностью, то его предварительно подвергают длительному диализу, удаляющему основную часть электролитов, и только после такой предварительной очистки применяют электродиализ. Преимущество электродиализа по сравнению с обычным диализом заключается в возможности удаления даже следов электролитов, что обыкновенным диализом не достигается. Поэтому метод электродиализа широко применяется на практике, например дри очистке белков - и даже при выделении нз сложных белков отдельных составных частей их. [48]
Поэтому если золь содержит большое количество электролита и обладает высокой электропроводностью, то его предварительно подвергают длительному диализу, удаляющему основную часть электролитов, и только после такой предварительной очистки применяют электродиализ. Преимущество электродиализа по сравнению с обычным диализом заключается в возможности удаления даже следов электролитов, что обыкновенным диализом не достигается. Поэтому метод электродиализа широко применяется на практике, например цри очистке белков и даже при выделении из сложных белков отдельных составных частей их. [49]
В особых случаях при очистке белков могут быть полезны такие энергичные осадители, как метафосфорная кислота, соли некоторых тяжелых металлов, трихлоруксусная кислота и ряд других. Очевидно, что использование осадителей такого типа, известных как денатурирующие агенты, возможно лишь при очистке белков, особо устойчивых к денатурации, или требует отработки весьма строгих условий, позволяющих защитить белки от денатурации. В то же время возможности использования относительно малых концентраций таких реагентов и большая полнота осаждения привлекают к ним внимание при разработке промышленных схем получения некоторых белков. [50]
Для выделения белка из растительных или животных тканей сырой материал тонко измельчают и экстрагируют подходящим растворителем, обычно на холоду. Выделение белков в том состоянии, в каком они находятся в природных продуктах, крайне затруднительно. Обычно строение белка при его извлечении в большей или меньшей степени нарушается. Очистка белков часто бывает вообще невозможна, а в лучшем случае требует очень совершенней техники. [51]
В процессе выделения и фракционирования белков необходимо принимать известные меры предосторожности. Молекулы белков весьма неустойчивы. Инкубация белков даже при умеренной температуре, например при 37, приводит, как правило, к их частичной денатурации. Большинство операций при очистке белка должно поэтому проводиться при температуре, близкой к точке замерзания используемого растворителя. Некоторые белки, однако, довольно устойчивы к нагреванию. Кратковременная тепловая обработка при выделении таких белков оказывается весьма полезной, так как дает возможность осадить большую часть загрязняющего материала. [52]
Для них характерны все свойства кислот и оснований. В зависимости от реакции среды и соотношения кислых и основных аминокислот белки в растворе несут или отрицательный, или положительный заряд, перемещаясь к аноду или катоду. Это свойство используется при очистке белков методом электрофореза. [53]
Значительные трудности возникают при необходимости удаления высокомолекулярных примесей, например, нуклеиновых кислот и полисахаридов. Вообще говоря, все описанные ниже приемы фракционирования белков используются и для отделения их от этих биополимеров. Кроме того, нуклеиновые кислоты и полисахариды могут быть разрушены с помощью соответствующих гидролитических энзимов. Лжшды при выделении и очистке водорастворимых белков обычно не следуют за ними, особенно при многостадийной очистке. Однако их удаление в тех случаях, когда они образуют с белком прочный комплекс, чрезвычайно затруднительно, ибо экстрагенты липидов - органические растворители - могут денатурировать белок. [54]
При этом потери белка в процессе хроматографии ничтожны. Даже такое сложное образование, как бактериофаг Т2, поддается очистке на DEAE-целлюлозе и может быть получено в химически чистом виде с 50 % - м выходом. Важно, что процедура хроматографии с градиентной элюцией весьма быстрая, требующая минимума приспособлений и потому широко доступная. Одна из важных и неприятных деталей очистки белков заключалась в отделении от низкомолекулярных веществ, в частности электролитов, количества которых могут быть весьма велики. [55]
Страницы: 1 2 3 4