Очистка - фермент
Cтраница 4
Многие ферменты дороги и быстро теряют свою активность. Применение бактерий, микроорганизмов и биологических тканей различного происхождения позволяет устранить недостатки, присущие ферментным биосенсорам. При этом отпадает необходимость в получении и очистке ферментов. Однако такие биосенсоры имеют низкую селективность вследствие того, что микроорганизмы, ткани растений и животных являются источниками самых разнообразных ферментов. Кроме того, время отклика биосенсоров на основе тканей и микроорганизмов может быть достаточно большим. Тем не менее, в последнее время наблюдается повышенный интерес к электродам, содержащим не сами ферменты, а их первозданные источники - биологические материалы. Установлено, что тканевые срезы выполняют функцию биокатализаторов. При этом пластины биоматериала могут храниться без потери активности в течение года. [46]
После того как было установлено, что в реакции ферментативного переаминирования вступают очень многие аминокислоты, стало очевидным, что в природе существует множество различных трансаминаз. Однако исследования по разделению и очистке этих ферментов не поспевают за открытием новых реакций переаминирования. Это объясняется, очевидно, тем, что разработка способов очистки ферментов вообще представляет сложную задачу, а может быть, и тем, что внимание исследователей распыляется в связи с большим разнообразием субстратов переаминирования, существование которых установлено или предполагается. [47]
Согласно международному боглаше-нию, за единицу активности фермента принимается такое количество фермента, которое катализирует превращение 1 мкмоля субстрата ( 1 мкмолъ 10 - 6 моля) в 1 мин при 25 С в оптимальных ус-ловиях - & ей1Ствия фермента. Удельной активностьюназывается число единиц ферментативной активности в расчете на 1 мг белка. Удельная активность-это мера чистоты ферментного препарата: она возрастает в процессе очистки фермента и становится максимальной и постоянной, когда фермент находится в чистом состоянии. [49]
Однако, в отличие от данного фермента, целлобиогидролаза II из того же источника не способна расщеплять арильные производные целлобиозы [28], а на производные целлоолигосахаридов с более высокой степенью полимеризации действует преимущественно по внутренним связям. Это позволяет регистрировать кинетику гидролиза только методом ВЭЖХ путем регистрации всех возможных продуктов реакции. Поэтому, учитывая недостаточную изученность субстратной специфичности целлобиогидролаз из других источников, следует при выделении и очистке ферментов предварительно тестировать все фракции по хромогенному производному целлотриозы методом ВЭЖХ. И лишь убедившись, что все интересующие компоненты способны в качестве одного из продуктов гидролиза образовывать ароматический спирт, можно переходить к фотометрической и ( или) флуориметрической регистрации их активности. [50]
Страницы: 1 2 3 4