Цитратный буфер
Cтраница 3
Эти разделения наглядно демонстрируют влияние природы подвижной фазы и чрезвычайно большое влияние ионной силы. На рис. 7.2 показано разделение рацемата 2 2 -динитродифеновой кислоты на колонке, заполненной крахмалом, при элюировании 1М цитратным буфером с рН 7 7 при 60 С. Наблюдаемая селективность разделения вполне удовлетворительна, но эффективность колонки очень умеренная. [31]
К 1 - 5 мл раствора, помещенного в эрленмейеровскую колбочку на 25 мл, прибавляют 50 - 100 мг цитратного буфера рН 2 5 или 4 7 и 1 каплю каприлового спирта. [32]
 |
Антибиотическая активность спирамицинов I, П и III201. [33] |
Для выделения спирамицинов ( форомацидинов) 201 культуральную жидкость экстрагируют AcOEt, из экстракта извлгкают основания при помощи 0 5 N АсОН, водную фазу подщелачивают и вновь экстрагируют AcOEt. После повторения этой операции получают аморфную смесь оснований, из которой лротивоточным распределением в системе хлороформ - - 0 2 М цитратный буфер с рН 4 9 ( 1: 1) или в системе бен-юл - фосфатный буфер с рН 6 5 выделяют сгшрамицины I, II и III наряду с небольшим количеством форомацидина D. Полученные спирами-цины вторично очищают противоточным распределением, а форомацидин D перекристаллизовывают из смеси Et2O с петролейным эфиром. Все четыре антибиотика представляют собой бесцветные кристаллические вещества. [34]
Если набить стеклянную трубку мелкозернистым ( с подходящей степенью-дисперсности) сульфированным полистиролом ( или, как принято говорить, смолой) и пропустить через нее кислый нитратный буфер с рН 3 25, то получится ионообменная колонка анализатора. При проведении анализа на поверхность смолы в колонке наливают раствор подлежащей разделению смеси аминокислот ( или обработанный гидролизат белка), и пропускают цитратный буфер, в результате чего начинается процесс хроматографирования, состоящий в том, что ионы аминокислот, проходя по колонке вместе с буфером, будут периодически вытеснять катионы, присоединенные к сульфогруппам, или сами вытесняться свободными катионами. [35]
По собственному поглощению на пластинке в коротковолновом УФ-свете можно определить 3 цг кислоты, которая после непродолжительного нагревания до 120 при 365 мц флуоресцирует голубоватым светом. Нижний предел чувствительности с иодоплатинатом ( желтоватое пятно на розовом фоне), фосфорномолибденовой кислотой ( серо-синее пятно) и смесью молибдат аммония - цитратный буфер ( голубое пятно) - величина того же порядка, а щелочной раствор нитрата серебра ( реактив № 137) ( серо-черное пятно) является менее чувствительным. [36]
По собственному поглощению на пластинке в коротковолновом УФ-свете можно определить 3 ] г кислоты, которая после непродолжительного нагревания до 120 при 365 мц флуоресцирует голубоватым светом. Нижний предел чувствительности с иодоплатинатом ( желтоватое пятно на розовом фоне), фосфорномолибденовой кислотой ( серо-синее пятно) и смесью молибдат аммония - цитратный буфер ( голубое пятно) - величина того же порядка, а щелочной раствор нитрата серебра ( реактив № 137) ( серо-черное пятно) является менее чувствительным. [37]
Разделение проводят на колонке ( 0 21x100 см) с сорбентом зипакс, содержащим 1 % этиленпропиленового сополимера; в качестве подвижной фазы используют систему 0 01 М раствор бората натрия 27 5 % ( по объему) метанола и цитратный буфер, содержащий 0 01 М одноосновной соли лимоннокислого натрия 10 или 15 % ( по объему) метанола. [38]
Байер и Шенк [284] водорастворимые ДНФ-аминокислоты хроматографировали с цитратным буфером ( рН3 0) втермостатируемойпри 30 С колонке со скоростью истечения 30 мл / ч и выделили для а-кератинов О-ДНФ-серин, S-ДНФ-цистеин, № - ДНФ-лизин, 0 - ДНФ-тирозин; для шелкового волокна - 0 - ДНФ-серин, № - ДНФ-лизин, О-ДНФ-тирозин и для коллагена-0 - ДНФ-серин, 0 - ДНФ-окси-пролин, № - ДНФ-оксилизин. [39]
А-сефарозы суспендируют в 0 1 М фосфатном буфере, рН 5 0 ( V& 5 мл), и заполняют пипетйу на 10 мл, взятую в качестве колонки. Препарат отдиализованных антител наносят на колонку и промывают ее 25 мл уравновешивающего буфера. В двух последних случаях фракции собирают в пробирки, содержащие 200 - 400 мкл 0 5 М фосфатного буфера ( рН 8 0) для быстрой нейтрализации цитратного буфера. После каждого опыта колонку промывают фосфатным буфером и хранят при 4 С. Связывающая емкость белок А-сефарозы составляет около 20 мг IgG на 1 мл геля. [40]
В сульфатном растворе ( например, 0 75М HaSCU) уран связывают в анионный комплекс, который, не поглощаясь, проходит через катионообменную колонку. Редкоземельные металлы при этом поглощаются количественно. Небольшую часть поглощенного урана вытесняют из колонки 0 75М Нз SOa. После этого редкоземельные металлы элюируют 6М НС1 [5 ] или цитратным буфером. Этим методом можно от редкоземельных элементов отделить торий, но при этом происходит некоторое перекрывание полос элюирования разделяемых металлов. Подобным образом может быть элюирован уран в виде отдельной фракции при помощи плавиковой [8 ] или щавелевой [15 ] кислот. Затем редкоземельные элементы выделяют из колонки соляной кислотой или определяют после сжигания ионита. [41]
Количественное определение нитросоединений производится путем восстановления их до соответствующих аминов избытком хлористого титана в кислом растворе. Реакцию ведут в токе углекислого газа при температуре кипения. Нитробензол и другие нерастворимые нитросоединения до восстановления подвергаются сульфированию. Восстановление нитросоединений ( например динитротолуола) хлористым титаном легко проходит при комнатной температуре, если пользоваться ацетатным или цитратным буфером. [42]
Удобно пользоваться готовыми пластинками типа Fixion50 - X8 ( Венгрия), на которые нанесен сильный катионит в натриевой форме. При нанесении образца на пластинку все аминокислоты должны сорбироваться в стартовой позиции путем их обмена с катионом натрия. Степень удержания аминокислот смолой зависит от степени диссоциации основных и кислотных групп аминокислот ( т.е. от величины их рК), от числа этих групп в молекуле, от способности к гидрофобным взаимодействиям со смолой и некоторых других условий. Ароматические и основные аминокислоты ( арг, гис, лиз, фен, тир), а также лейцин прочно удерживаются на катионите. Для их разделения применяют пропускание цитратного буфера рН 5 25 с концентрацией Na 0 35 моля через слой смолы. В этих условиях все остальные аминокислоты ( кислые и нейтральные) приобретают высокую подвижность и идут с фронтом растворителя. Для выявления отдельных аминокислот пластинку опрыскивают раствором нингидрина. Появляются фиолетовые пятна аминокислот, располагающиеся по всей длине пластинки по степени возрастания подвижности аминокислот. Полуколичественная оценка содержания аминокислоты в смеси достигается путем сравнения величины пятна из анализируемого образца с пятном соответствующей стандартной аминокислоты. [43]
Многие групповые разделения основаны на комплексообразова-яии. Рассел [23 ] показал, что цирконий и ниобий могут быть селективно элюированы щавелевой кислотой. Этот факт объяснялся тем, что щавелевая кислота образует с указанными металлами особо прочные комплексы. В работе Томпкинса с сотрудниками [26 ] комплексообразование в растворах щавелевой кислоты использовано для группового разделения радиоактивных изотопов. Затем, трех -, двух - и однозарядные ионы могут быть разделены при помощи цитратных буферов. [44]
Аналогично если размер Y больше, чем X, то константа также оказывается больше единицы. Причиной этого интересного результата является то, что катионы гидрати-руются и на смоле и вне ее. Из-за недостатка воды в порах смолы ион меньшего размера находится преимущественно в растворе, где он гидратируется полнее. Поэтому ион большего размера втягивается в смолу. При сохранении этих общих закономерностей в ряду от La3 до Lu3 уменьшение радиуса приводит к понижению сродства к ионообменной смоле. Однако при любой практически возможной высоте колонки разделение настолько мало, что промежуточные фракции не содержат чистых образцов различных лантанидов, а по-прежнему представляют собой смеси. Такой метод разделения становится более пригодным практически при использовании цитратных буферов в элюанте. Ионы в состоянии 3 образуют комплексы с цитратом, которые не абсорбируются в колонке. Такое изменение сродства противоположно характеру изменения абсорбции смолой. Поэтому два эффекта взаимно усиливаются и увеличивают различия между лантанидными элементами. При использовании описанного метода разделение, хотя и остается трудным, все же становится возможным. [45]
Страницы: 1 2 3 4