Порат

Cтраница 2

Метод гель-хроматографии был предложен Флодином и Поратом в 1959 г. Разделение смесей этим методом основано на способности гелей некоторых природных веществ и гелей отдельных синтетических продуктов ( сефадексы, молсе-лекты и др.) с контролируемой пористостью сортировать и разделять вещества в соответствии с размерами и формой их молекул. При разделении веществ этим методом неподвижной фазой служит гель, состоящий из пространственной сетки, образованной мицеллами коллоида, и жидкости, которая связана с этой сеткой. [16]

Очень опасны и продукты жизнедеятельности - афлотоксины, порат жающие рис, сорго, косточковые, кожуру цитрусовых, а также домашних животных, поедающих зараженный корм. [17]

Гели были впервые применены для разделения жидких смесей Поратом и Флодином в 1959 г. В гель-хроматографии подвижной и неподвижной фазами служит одна и та же жидкость, т.е. растворитель. Часть жидкости, протекающая вдоль зерен геля ( твердого носителя), выполняет роль подвижной фазы и переносит компоненты смеси вдоль колонки. Но другая часть жидкости проникает в поры зерен геля и играет роль неподвижной фазы. [18]

Оригинальным решением проблемы увеличения эффективной высоты колонки является описанный Поратом и Бенничем [43] метод, названный рециркуляционной хроматографией. Отличается этот метод от обычно применяемого тем, что выходящий из колонки элюат вновь подается на колонку и проходит через нее второй ( и большее число), раз, в результате качество фракционирования смеси улучшается. На рис. 6.9 показана схема установки для рециркуляционной хроматографии. В эту установку входят колонка с двумя плунжерами, перистальтический насос, детектор с самописцем, регистрирующим поглощение в УФ-области, и четырехходовой кран. Необходимо, чтобы объем системы от вывода из колонки до ввода в нее был возможно меньше и чтобы в насосе не происходило смешения жидкости. [19]

Наиболее широко используемый метод связывания аффинного лиганда с сефарозой разработан Поратом, Аксеном и Эрнбаком [2,55]; он основан на активации носителя бромцианом. Аффинные лиганды связываются посредством первичных алифатических или ароматических аминогрупп в непротонированной форме. Ак-сен и Эрнбак [1] предположили, что при этом образуются три различные структуры, а именно N-замещенные карбаматы, N-за-мещенпые имидокарбонаты и N-замещенные изомочевины. N-за-мещенная мочевина, как предположил Свенсон [72] на основании работ по изоэлектрофокусированию, является преобладающей формой. [20]

Подлинный успех хроматографии полимеров связан с открытием в 1959 г. Поратом и Флодиным [7] гель-проникающей хроматографии, впервые использованной ими для фракционирования биополимеров на сшитых декстрановых гелях. В отличие от метода Бейкера - Вильямса фракционирование здесь осуществляется намного проще и быстрее вследствие диффузионного обмена макромолекулами между фазой пористого сорбента и свободным пространством хроматографической колонки, а молеку-лярно-массовые. [21]

Опыты с применением центрифуги были описаны впервые Флодином, Желоттом и Поратом [104], которые концентрировали таким путем фильтрат культу-ральной жидкости Polyporus versicolor. [22]

Для метода, основанного на использовании хелатных гелей, содержащих эти ионы, Порат и др. [48] ввели термин ме-таллохелатная аффинная хроматография. Этот метод детально рассмотрен в разд. [23]

Гель-хроматография предложена в 1959 г. Поратом и Фло-дином, аффинная хроматография - в 1967 г. Поратом, Аксеном и Эрнбеком. Различные варианты однофазной хроматографии были разработаны Гиддингсом. [24]

Широкое распространение в качестве общепринятого способа фракционирования получил метод ГПХ после опубликования в 1959 г. работы Пората и Флодина [10], где были описаны созданные авторами новые декстрановые гели с наиболее подходящими для практических целей размерами пор и довольно высокой жесткостью. Авторы этой статьи убедительно показали возможности метода ГПХ на примере фракционирования смеси глюкозы с двумя фракциями декстрана с молекулярными весами 1000 и 20 000 соответственно. [25]

Для активации больших количеств агарозы и для активации мембран из агарозы или тонких слоев агарозы, покрывающих стеклянные шарики, Порат и др. [54] разработали очень простой и воспроизводимый метод активации в щелочном фосфатном растворе очень высокой буферной емкости; при этом отпадает необходимость контроля рН и интенсивного перемешивания. Найдены условия для высокой, средней и низкой степеней активации, которые выбираются, исходя из природы связываемого аффинного лиганда. Методики даны для гелей с разным содержанием ( р, %) агарозы в набухшем геле. [26]

Обсуждая влияние солей, следует отметить, что фракционирование белков основано на гидрофобной высаливающей адсорбции на неионных амфифильных гелях, для которой Порат и др. [40] ввели термин гидрофобная высаливающая хроматография. Ам-фифилыные гели получаются при введении ограниченного числа гидрофобных групп в вещества, которые используются как гидрофильные гели, при этом образуются сшитые полимеры, обладающие высокой проницаемостью и способные набухать как в воде, так и во многих органических растворителях. В водных растворах они проявляют сродство к растворенным гидрофобным веществам и соединениям с гидрофобными группами. Следовательно, неионные амфифильные гели демонстрируют чистое гидрофобное взаимодействие с гидрофобными областями на поверхности белковых молекул или других растворенных веществ вместо смешанной ио нно-гидрофобной адсорбции производных атарозы. В определенных условиях адсорбционная емкость амфифильных гелей по белкам может быть очень высока. В присутствии ЗМ хлористого натрия сорбция экстракта и элюиров-ание отдельных фракций осуществляется путем повышения фН, снижения ионной силы и уменьшения полярности растворителя. После использования этой колонки более 20 раз и с 50-кратным количеством белка ( относительно сухого веса геля) гидрофобный сорбент не изменяет своих хроматографических свойств. Принцип, который лежит в основе высаливающей адсорбции, до конца не ясен. Очевидно, главной движущей силой является возрастание энтропии вследствие изменения структуры воды, окружающей гидрофобные группы. Гидрофобная хроматография может иметь преимущества в растворах с высокой ионной силой, которые используются при выделении нестабильных ферментов, например а-изопропилмалатизомеразы [4], требующих для стабилизации высоких концентраций солей. [27]

Порат и др. [29] использовали тот факт, что в условиях экстракции из ацетонового порошка физиологически активные циклопептиды задней доли гипофиза ( окситоцин и вазопрессин) прочно ассоциированы с сопутствующими белками ( фиг. [28]

Когда состав подвижной и неподвижной фазы одинаков, пористый носитель иммобилизированной жидкости часто называют неподвижной фазой. Порат и Флодин [74] успешно использовали для разделения сшитые декстраны в качестве молекулярных сит, и этот материал оказался необыкновенно эффективным. Его применяют в виде геля под названием сефадекс [75] - это сшитый сополимер эпихлоргидрина [ СН2СН ( О) СН2С1 ] и декстрана, полисахарида, состоящего из глюкозы с преимущественно 1 6-глико-зидными связями. Степень набухания полимера зависит от растворителя, степени сшивки, степени и вида замещения гидроксиль-ных групп. [29]

Ферментативное расщепление а - МСГ. [30]

Страницы: 1 2 3 4