Приготовление - колонка
Cтраница 2
В жидкостной хроматографии к приготовлению колонок предъявляются гораздо большие требования, чем в газовой. Недостатки в заполнении колонок в ЖХ приводят к гораздо большим относительным уширениям пика ( см. гл. Крайне необходимо, в частности, чтобы неподвижная фаза была нанесена на носитель в виде тонкой гомогенной пленки и чтобы колонка была равномерно заполнена носителем. Существует несколько методов, с помощью которых могут быть удовлетворительно осуществлены оба эти требования, хотя следует отметить, что ни одна из этих процедур не является р-птимальнрй. [16]
 |
Влияние объема образца на эффективность колэнки. [17] |
В жидкостной хроматографии к приготовлению колонок предъявляются гораздо большие требования, чем в газовой. Недостатки в заполнении колонок в ЖХ приводят к гораздо большим относительным уширениям пика ( см. гл. Крайне необходимо, в частности, чтобы неподвижная фаза была нанесена на носитель в виде тонкой гомогенной пленки и чтобы колонка была равномерно заполнена носителем. [18]
В качестве примера здесь описано приготовление колонки, содержащей 30 мл суспензии МАК. В хроматографическую колонку с внутренним диаметром 30 мм сначала помещают бумажный порошок и затем добавляют примерно 20 мл 0 1 М раствора забуференной соли. Для того чтобы жидкость не вытекала из колонки, ее нижнюю часть перед добавлением жидкости закрывают пробкой. Смесь тщательно суспендируют стеклянной палочкой и пробку вынимают; после вытекания жидкости на дне колонки образуется ровный слой ( 2 - 4 мм) бумажного порошка. Затем колонку вновь закрывают снизу пробкой и пипеткой с большим выходным отверстием на слой целлюлозы медленно наливают 30 мл суспензии МАК. После этого пробку вынимают и МАК уплотняют в колонке под давлением воздуха. Для того чтобы колонка не подсохла, подачу воздуха прекращают в тот момент, когда над слоем МАК почти не останется буферного раствора. Затем на слой МАК наливают прокипяченную суспензию 2 г кизельгура в 0 05 М натрий-фосфатном буфере и уплотняют ее точно так же. Слой кизельгура предохраняет слой МАК от повреждений. Обычно колонки промывают забуференным 0 4 М NaCl, а при фракционировании ДНК с небольшим молекулярным БССОМ для промывки используют ОД М раствор забуференной соли. Концентрацию образца нуклеиновой кислоты в стандартном солевом растворе ( 0 15 М NaCl 0 015 М цитрат натрия) доводят примерно до 20 - 100 мкг / мл; этот раствор осторожно наносят на колонку, стараясь не нарушить поверхностный слой, и пропускают его через колонку под давлением воздуха со скоростью примерно 3 мл / мин. Для определения степени адсорбции образца на колонке пропущенную через колонку жидкость собирают и измеряют ее поглощение в УФ-свете. После нанесения образца колонку зшовь промывают 40 мл исходного забуференного солевого раствора. [19]
В жидкость-жидкостной хроматографии требования к приготовлению колонок гораздо большие, чем в жидкость-твердой или газовой. [20]
Через колонку, заряженную хлористым анионитом ( приготовление колонки см. выше), пропускают 100 мл исследуемого раствора, содержащего до 3 мг-экв бария и свинца. Ионы бария, содержащиеся в фильтрате, определяют комплексонометрическим методом, с эриохром черным Т в качестве индикатора. Конец титрования в данных условиях определяют по резкому переходу окраски, обусловленному ионами магния. Часть ионов бария, эквивалентная добавленному количеству ионов магния, оказывается в осадке и не титруется. [21]
 |
Ионообменные хроматографические колонки. [22] |
Такие отклонения влияют на разрешение колонки и затрудняют приготовление колонок с воспроизводимыми характеристиками. При упаковке хроматографических колонок смолой с частицами очень маленького размера ( диаметром меньше 20 мкм) возникают дополнительные проблемы. При гравитационном методе заполнения частицы оседают очень медленно и для заполнения колонки нужно много времени. [23]
Для любых хроматографических методов первостепенное значение имеет стадия приготовления колонки. Церраи и Герсини считают [22]: Приготовление колонки является основной, решающей стадией; именно на этой стадии способности исследователя как экспериментатора играют наиболее важную роль. Очевидно, что для того, чтобы использовать пеноматериал в качестве носителя в распределительной хроматографии с обращенными фазами, необходимо разработать удобную методику заполнения колонки. Эта методика должна быть тщательно продумана, чтобы обеспечить возможность получения однородного слоя носителя и получения колонки с хорошими гидродинамическими характеристиками и эксплуатационными качествами. Методика не должна предъявлять слишком высоких требований к квалификации исследователя. Колонку заполняют обработанным с помощью экстра-гента и высушенным носителем ( в виде маленьких кубиков или цилиндров), слегка уплотняя его стеклянной палочкой. Для того чтобы избежать образования воздушных пузырьков во время заполнения, используют следующий прием. Кран / ( рис. 1) соединяют с вакуумным насосом, а кран 2 закрывают. Потерю носителя во время отсасывания предотвращают, соединяя кран 1 с колонкой при помощи шлифа с впаянной пористой перегородкой. [24]
Для получения хороших результатов необходимо строго придерживаться метода приготовления колонки. Молекулярное сито 5 - А ( 30 / 70 меш, США) активируют в течение 1 час, высушивая в термостате при 300, и колонку заполняют сразу же после извлечения материала из термостата. После заполнения колонку немедленно соединяют с хроматографом и пропускают через нее с малой скоростью поток гелия, пока не будет достигнута рабочая температура. Это сохраняет активность набивки в процессе охлаждения. При таких условиях аргон, содержащийся в воздухе, проявляется в виде небольшого пика непосредственно перед кислородом. Времена удерживания этих двух газов равны 6 и 8 мин соответственно. Очевидно, при указанной температуре азот необратимо связывается или по крайней мере элюируется с молекулярного сита очень медленно, поскольку его пик не появляется до нагрева колонки. [25]
Этого можно добиться, применяя автоматизацию, улучшая методы приготовления колонок ( например, используя текстурированные стеклянные бисерные шарики) для получения высокой эффективности или разрабатывая другие, еще не открытые способы. [26]
Можно отметить также недостаточное внимание, которое уделено авторами приготовлению промышленных колонок диаметром до 10 - 15 см; последние позволяют обеспечить производительность на уровне десятков и сотен килограммов чистых соединений. [27]
Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, приготовление хроматографичес-кой колонки и сорбционной трубки, установление градуировоч-ной характеристики, отбор проб воздуха. [28]
Как отмечалось во введении, большое внимание следует уделять способам приготовления колонок, которые позволили бы избежать испарения разбавителя и осаждения реагента и хелатов металлов. [29]
Как и в других видах хроматографического анализа, при получении осадочных хроматограмм наиболее ответственной частью является приготовление осадочно-хроматографической колонки. [30]
Страницы: 1 2 3 4