Cтраница 4
Установлено, что способ приготовления колонок не отражается на эксплуатационных характеристиках колонки. [46]
Для любых хроматографических методов первостепенное значение имеет стадия приготовления колонки. Церраи и Герсини считают [22]: Приготовление колонки является основной, решающей стадией; именно на этой стадии способности исследователя как экспериментатора играют наиболее важную роль. Очевидно, что для того, чтобы использовать пеноматериал в качестве носителя в распределительной хроматографии с обращенными фазами, необходимо разработать удобную методику заполнения колонки. Эта методика должна быть тщательно продумана, чтобы обеспечить возможность получения однородного слоя носителя и получения колонки с хорошими гидродинамическими характеристиками и эксплуатационными качествами. Методика не должна предъявлять слишком высоких требований к квалификации исследователя. Колонку заполняют обработанным с помощью экстра-гента и высушенным носителем ( в виде маленьких кубиков или цилиндров), слегка уплотняя его стеклянной палочкой. Для того чтобы избежать образования воздушных пузырьков во время заполнения, используют следующий прием. Кран / ( рис. 1) соединяют с вакуумным насосом, а кран 2 закрывают. Потерю носителя во время отсасывания предотвращают, соединяя кран 1 с колонкой при помощи шлифа с впаянной пористой перегородкой. [47]
Описанная впервые Манделем и Хорши [2] колонка содержит два слоя МАК с различным соотношением метилированного альбумина и кизельгура. Позднее был предложен более простой способ приготовления колонки, который также дает хорошие результаты; мы опишем подробно последний способ. [48]
В табл. 58 приведены результаты некоторых хроматографи-ческих разделений. В шестой графе указаны количества рацемических или диастереоизомерных веществ, вносимых в колонку, в восьмой графе приведено время, необходимое для хроматогра-фирования, без учета времени, затраченного на приготовление колонки. В девятой графе приведены количества одного энантио-мера ( или диастереоизоиера), а степень его оптической чистоты указана в десятой графе. Вообще говоря, обнаружение заключалось в определении количества и оптической чистоты энантио-мера ( или диастереоизомера; во фракции фильтрата без отделения от большого объема растворителя и, возможно, от других растворенных веществ. [49]
Можно использовать любую имеющуюся в продаже реактивную ДЭАЭ-целлюлозу с ионообменной емкостью 0 70 - 0 75 мэкв / г. Для фракционирования 200 мг полисахаридов требуется - 20 г сухой ДЭАЭ-целлюлозы. Для больших количеств полисахаридов нужно брать колонки соответственно больших размеров. При приготовлении колонки особое внимание следует обратить на предотвращение загрязнения элюатов частицами целлюлозы, которое искажает результаты определения полисахаридов. Поэтому желательно предварительно удалить из ДЭАЭ-целлюлозы фракцию наиболее мелких частиц. [50]
Не существует безошибочного метода выбора наилучшей жидкой фазы для данного частного разделения. При выборе неподвижной фазы главным образом руководствуются накопленным опытом, причем часто наилучшую фазу определяют в результате подбора. Важные данные по технологии приготовления колонок уже были опубликованы в литературе; мы приведем краткий обзор имеющихся сведений, чтобы помочь читателю избежать непроизводительных затрат времени. [51]