Cтраница 2
Полностью этерифицированные пирофосфаты представляют собой эффективные химические фосфорилирующие агенты в присутствии третичных оснований, причем в значительной степени их активность зависит от природы алкильных или арильных групп. Так, тетрабензилпирофосфат - относительно слабый фосфорилиру-ющий агент по отношению к таким слабым нуклеофилам, как спирты, в то время как тетрафенилпирофосфат является более сильным агентом, а тетра-п-нитрофенилпирофосфат настолько активен, что потребность в основном катализе вообще отпадает. Для несимметрично замещенных пирофосфатов ( таких, как Р1 - дифенил - Р2 - дибензилпирофос-фат) фосфорилирование протекает таким образом, что продукт обычно образуется из более слабой из двух кислот, образующих ангидрид. [16]
Полученный енолфосфат ( 3) является активным фосфорилирующим агентом. Зтот метод был успешно использован для образования межнуклеозидных связей. [17]
Продукт фосфорилирования креатина - фосфокреатин - служит фосфорилирующим агентом при гликолизе в мускулах позвоночных. [18]
Полученный енолфосфат ( 3) является активным фосфорилирующим агентом. Зтот метод был успешно использован для образования межнуклеозидных связей. [19]
В настоящее время хлорокись фосфора вытеснена более эффективными фосфорилирующими агентами. [20]
Известны примеры синтезов биохимических препаратов, где в качестве фосфорилирующих агентов применялись хлорокись фосфора, дифенил -, дибензил -, бис - ( / г-нитро-фенил) -, бис - ( л-нитробензил) - или ди-трет-бутилхлорфосфаты, N-фениламидодихлорфосфат, N. [21]
В другом варианте анилидная группа может вводиться п составе несимметричного фосфорилирующего агента. [22]
Синтез проводят путем добавления раствори первого нуклсозида в тстра-к раствору фосфорилирующего агента в лутндине, выдерживания смеси в течение короткого времени и затем добавления раствора второго нуклео-зида в тетрагидрофуране. Только после завершения реакции приступают к окислению, вводя кристаллический иод, растворенный в смеси вода - тетрагидрофу-ран. Окисление также проходит очень быстро. Конечно, такой порядок добавления реагентов приводит к образованию некоторого количества нежелательных ( 3 - - 3) - и ( 5 - - 5) - изомеров. [23]
Экзоциклические аминогруппы в нуклеозидах могут подвергаться и фосфорилированию под действием фосфорилирующих агентов. Образующиеся при этом фосфоамиды не были охарактеризованы, а лишь обнаружены с помощью хроматографических методов. Возможность протекания такой реакции заставляет использовать при синтезе олигонуклеотидов защищенные по аминогруппе производные нуклеозидов и нуклеотидов. В отличие от обычных фосфоамидов продукты N-фосфорилирования нуклеозидов легко расщепляются при действии аммиака. [24]
Аналогичным образом смешанные ангидриды диэфиров фосфорных кислот и сульфокислот действуют как фосфорилирующие агенты, когда сульфокислота является более сильной кислотой, чем фосфорная; в противоположном случае происходит сульфирование. Однако в этих случаях очень существенным может оказаться влияние среды. Так, в диоксане смешанный ангидрид метансульфо-кислоты ( или этансульфокислоты) и уридин-2 3 -циклофосфата в присутствии три-н-бутиламина ( пространственно затрудненного основания) является сульфирующим агентом и в результате реакции образуется 5 - О-метансульфо ( или этансульфо) уридин-2 3 -циклофосфат. В пиридине то же вещество ведет себя как фосфорили-рующий агент, а продуктами реакции являются метансульфокисло-та и полиуридиловые кислоты с различной длиной цепи. По-видимому, пиридин действует каталитически через образование фос-фопиридиниевого производного. На реакцию также могут оказывать влияние такие факторы, как ионизация и сольватация, см. стр. Аналогичный эффект, возможно, хорошо заметен при образовании смеси полиадениловых кислот ( оканчивающихся на 5 -бензилфосфитную группу) и аденозин-2 3 -циклофосфат - 5 -бен-зилфосфита из смешанного ангидрида аденозин-2 3 -циклофосфата и бензилфосфористой кислоты в диоксановом растворе в присутствии пиридина ( см. также стр. [25]
Показано, что определенное влияние на скорость фосфорилирования могут оказывать диффузия фосфорилирующего агента в гранулах сополимера, а также его концентрация в фазе набухшего сополимера. [26]
Увеличение скорости в реакциях ионов оксимов также значительно больше для ацилирующих и фосфорилирующих агентов, чем для алкилгалогенидов. Так, наиболее основные окси-мы, как, например, кетоксимы и амидоксимы, в своей анионной форме не обнаруживают а-эффекта по отношению ко всем изученным соединениям, таким, как, например, п-нитрофенилацетат, фтористый бензол, этилхлорформиат, эфиры и фторангидриды фосфорной кислоты и хлористый бензоил. [27]
Замена двух атомов хлора на более объемистые приводит к еще большей избирательности фосфорилирующего агента. [28]
Обычно фосфорилирование осуществляют по уравнению ( 2), используя в качестве фосфорилирующих агентов активированные производные фосфорной кислоты или ее моно - и диэфиры, например хлорфосфаты. [29]
Рассмотренные в настоящем разделе данные о ферментативных реакциях с участием биологически важных фосфорилирующих агентов находятся в соответствии с современными представлениями о механизме нуклеофильного замещения у тетраэдрического атома фосфора. Из этих данных следует, что той аналогии, которая иногда допускается в трактовке механизмов ферментативных реакций, связанных с нуклеофильным замещением у атома углерода карбонильной группы в производных карбоновых кислот и нуклеофильным замещением у тетраэдрического атома фосфора, быть не может. Важная роль Sd-орбит атома фосфора и р - - сопряжения заместителей, связанных с фосфором в переходном состоянии при нуклеофильном замещении у атома фосфора, из рассмотренного материала вполне очевидна. Дальнейшее исследование этого вопроса может привести к лучшему пониманию зависимости между строением, реакционной способностью и физиологической активностью некоторых фосфорсодержащих соединений, а также к новым интересным данным в области энзимологии, в частности к дальнейшему изучению природы макроэргических связей. [30]