Cтраница 4
Данные, полученные в 1969 г.: жирорастворимый желтый краситель. При работе с ненасыщенной сэндвич-камерой нанесенное на сухой слой пятно вещества противилось растворению, когда фронт растворителя достигал пятна. После кратковременного предварительного насыщения ( в насыщенной обычной камере) фронт растворителя подходит уже к предварительно растворенному пятну. [46]
При использовании метода отпечатков пальцев наиболее подходящим методом регистрации разделенных аминокислот или пептидов является авторадиография. Листы бумаги не рекомендуется разрезать на полосы для радиосканирования, так как линия разреза может пройти по пятнам веществ. [47]
Специфичной осообенностью такого подхода, описанного в 1970 г. Сондерсом и Снайдером [80], является то, что фронт, пятна и линия подачи растворителя движутся с одинаковой скоростью. В этом отличие от других методов, при употреблении которых фронт и линия подачи растворителя движутся ( сами по себе) с той же самой скоростью, но которая оказывается выше скорости перемещения пятен веществ. При использовании варианта Сондерса и Снайдера критически важная ( нуждающаяся в разделении) пара веществ может проходить путь, равный почти всей длине слоя. [48]
В той же работе описаны другие способы прямого переноса вещества из хроматографического слоя в порошкообразный бромид калия. Сорбент с пятном вещества помещают в маленькую пробирку. В слой сорбента вставляют стеклянный капилляр, заполненный бромидом калия. С помощью шприца к сорбенту прикапывают небольшое количество растворителя. Раствор вещества всасывается бромидом калия, при этом тонкие частицы сорбента остаются в нижней части столбика. Операцию повторяют несколько раз, так что раствор вещества концентрируется в верхней части столбца. Вокруг пятна на хроматограмме удаляют сорбент. К одной стороне оставшегося слоя подсыпают примерно 20 мг бромида калия, а с противоположной стороны к слою с помощью шприца подводят растворитель. [49]
Для круговой ( радиальной) хроматографии на пластинках, покрытых тонким слоем сорбента, используется горизонтальный способ передвижения растворителя. При этом способе растворитель из чашки подается в центр пластинки с помощью фитиля. В процессе разделения пятна вещества движутся от центра к периферии в виде концентрических колец. [50]
Все высушенные хроматограммы проявляют анилинфталатом. Из приведенных хроматограмм вырезают кусочки с пятном интересующего вещества, каждый кусочек разрезают на мелкие тонкие полосочки, которые кладут в пробирку и заливают 8 мл ледяной уксусной кислоты или 8 мл спиртового раствора соляной кислоты. Элюирование ведут 1 ч при комнатной температуре. Через каждые 5 - 10 мин пробирки с кусочками хроматограмм энергично взбалтывают для ускорения элюации. Через 1 ч элюат осторожно сливают в подготовленную сухую пробирку и измеряют его оптическую плотность на фотоколориметре. Если пользуются фотоэлектроколориметром ФЭК-М, то интенсивность окраски измеряют в кювете шириной 10 мм. [51]
Особенно при количественных определениях радиометрические методы имеют ряд преимуществ благодаря их высокой чувствительности. Особая сложность в бумажной хроматографии заключается в том, чтобы сделать видимыми на бумаге пятна вещества. Разделение и количественное определение многих веществ неосуществимо из-за отсутствия соответствующих цветных реакций. При радиометрических определениях цветные реакции не нужны. В тех случаях, когда неактивные вещества могут быть переведены в меченые соединения при помощи радиоактивных индикаторов, они определяются и идентифицируются по излучению. В тех случаях, когда неактивные вещества ( элементы), разделенные методом бумажной хроматографии, имеют большое эффективное сечение захвата нейтронов, хроматограммы можно облучать нейтронами в реакторе и измерять радиометрически. [52]